[发明专利]鸦葱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱

权利要求书

1.鸦葱指纹图谱的建立方法，其特征在于将鸦葱制成供试品溶液，经高效液相色谱仪分离检测，获得鸦葱的指纹图谱；

所述方法包括如下步骤：

1)供试品溶液的制备：取鸦葱药材粗粉，以乙醇溶液超声提取，过滤，取滤液适量采用微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；

2)参照物溶液的制备：取鸦葱黄酮苷A(5,7,3′,4′-四羟基黄酮-6-C-β-D-吡喃葡萄糖碳苷)、鸦葱黄酮苷D(5,7,4′-三羟基黄酮-8-C-β-D-吡喃葡萄糖碳苷)对照品，溶于甲醇溶液作为参照物溶液；

3)制作鸦葱指纹图谱：分别精密吸取供试液溶液和参照物溶液，经高效液相色谱仪分离检测，其中，流动相的组成为14.6mmol·L^-1的磷酸溶液-乙腈；采用梯度洗脱；得到鸦葱指纹图谱。

2.如权利要求1所述的鸦葱指纹图谱的建立方法，其特征在于所述供试溶液按如下步骤制备：精密称取鸦葱药材粗粉2.00g，置具塞容器中，精密加入70％乙醇50ml，密塞后称定重量，超声提取1h，静置，放冷，70％乙醇补足缺失重量，摇匀，滤过，取滤液适量采用0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。

3.如权利要求1所述的鸦葱指纹图谱的建立方法，其特征在于所述的高效液相色谱仪分离检测条件为：色谱柱为：Phenomenex Gemini5u C18110A(250×4.60mm5micron)柱；流动相为14.6mmol·L^-1的磷酸-乙腈；采用梯度洗脱：00min→15min→30min→50min→70min→75min，乙腈3％→15％→18％→30％→40％→66％；流速1ml·min^-1；检测波长为273nm；进样量10μl；柱温25℃。

4.如权利要求1所述的鸦葱指纹图谱的建立方法，其特征在于所述的参照物溶液按如下步骤制备：取鸦葱黄酮苷A(5,7,3′,4′-四羟基黄酮-6-C-β-D-吡喃葡萄糖碳苷)、D(5,7,4′-三羟基黄酮-8-C-β-D-吡喃葡萄糖碳苷)对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释成每1ml中黄酮苷A(5,7,3′,4′-四羟基黄酮-6-C-β-D-吡喃葡萄糖碳苷)0.1mg、D(5,7,4′-三羟基黄酮-8-C-β-D-吡喃葡萄糖碳苷)0.1mg的混合溶液，摇匀。

5.由权利1至4中任一项所述的鸦葱指纹图谱的建立方法得到的鸦葱标准指纹图谱，其特征在于：图谱总长度为75min，有13个特征峰，第7、10号色谱峰分别为对应鸦葱黄酮苷A(5,7,3′,4′-四羟基黄酮-6-C-β-D-吡喃葡萄糖碳苷)、鸦葱黄酮苷D(5,7,4′-三羟基黄酮-8-C-β-D-吡喃葡萄糖碳苷)，7号峰平均保留时间为31.65min，以7号峰为参照峰，计算特征峰的相对保留时间和相对峰面积，平均相对保留时间和相对峰面积如下：

1号峰，平均相对保留时间为0.6916，平均相对峰面积为1.1849；

2号峰，平均相对保留时间为0.7769，平均相对峰面积为0.2001；

3号峰，平均相对保留时间为0.8470，平均相对峰面积为0.3560；

4号峰，平均相对保留时间为0.9215，平均相对峰面积为0.3585；

5号峰，平均相对保留时间为0.9515，平均相对峰面积为1.2582；

6号峰，平均相对保留时间为0.9636，平均相对峰面积为0.3097；

7号峰，平均相对保留时间为1.0000，平均相对峰面积为1.0000；

8号峰，平均相对保留时间为1.0439，平均相对峰面积为0.3555；

9号峰，平均相对保留时间为1.1185，平均相对峰面积为0.0643；

10号峰，平均相对保留时间为1.1712，平均相对峰面积为0.6158；

11号峰，平均相对保留时间为1.4673，平均相对峰面积为0.2808；

12号峰，平均相对保留时间为1.5434，平均相对峰面积为0.1145；

13号峰，平均相对保留时间为1.6789，平均相对峰面积为0.1384。