[发明专利]一种SNP分型方法及试剂盒

权利要求书

1.一种SNP分型方法，其特征在于，包括以下步骤：

A.将含待测SNP位点的核酸片段可寻址的固定在固相载体上；

B.对固定在固相载体上的含待测SNP位点的核酸片段进行测序，进而确定待测SNP位点的基因型；

所述含待测SNP位点的核酸片段是通过非单分子扩增获得的产物；

所述测序方法为第二代高通量基因测序技术。

2.根据权利要求1所述的SNP分型方法，其特征在于，所述步骤A包括以下步骤：

A1、利用特异性引物对对待测样本进行非单分子扩增，得含待测SNP位点的核酸片段；

A2、将含待测SNP位点的核酸片段固定在微球上，然后将微球可寻址的固定在固相载体上。

3.根据权利要求2所述的SNP分型方法，其特征在于，所述步骤A2包括以下步骤：

A21、将含待测SNP位点的核酸片段与接头连接，得连接产物；

A22、将连接产物固定在微球上，然后将微球可寻址的固定在固相载体上。

4.根据权利要求2所述的SNP分型方法，其特征在于，所述步骤A2包括以下步骤：

A21、将含待测SNP位点的核酸片段与固定在微球上的接头连接，在连接过程中，使整个反应体系周期性震荡，得被固定在微球上的连接产物；

A22、将固定有连接产物的微球可寻址的固定在固相载体上。

5.根据权利要求1所述的SNP分型方法，其特征在于，所述步骤A包括以下步骤：

A1、利用特异性引物对对待测样本进行非单分子扩增，在扩增反应中，使整个扩增体系周期性震荡，得固定有含待测SNP位点的核酸片段的微球；所述特异性引物对中仅有一种引物被预先固定在微球上；

A2、将固定有含待测SNP位点的核酸片段的微球可寻址的固定在固相载体上。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的SNP分型方法，其特征在于，所述待测SNP位点有多个，所述步骤A为：将多种含待测SNP位点的核酸片段分别可寻址的固定在固相载体上；每种含待测SNP位点的核酸片段与各待测SNP位点相对应。

7.根据权利要求1至5中任一项所述的SNP分型方法，其特征在于，所述含待测SNP位点的核酸片段来源于多个待测样本；所述待测SNP位点有多个；

所述不同待测样本来源的含不同待测SNP位点的核酸片段均是通过非单分子扩增获得的产物，它们均连有标签序列；所述标签序列用于识别不同的待测样本和待测SNP位点的类型；所述步骤A为：

将多种不同待测样本来源的含不同待测SNP位点的核酸片段分别可寻址的固定在固相载体上。

8.根据权利要求1所述的SNP分型方法，其特征在于，所述步骤B中的测序方法为连接测序法或合成测序法。

9.根据权利要求8所述的SNP分型方法，其特征在于，所述步骤B进行测序反应时的锚定引物为待测SNP位点所在位置的3’端的互补序列或待测SNP位点所在位置的5’端的互补序列。

10.根据权利要求3或4所述的SNP分型方法，其特征在于，所述接头为单突出末端接头，且该突出末端为其所在链的3’末端，碱基为T。

11.根据权利要求2至5中任一项所述的SNP分型方法，其特征在于，所述特异性引物对中的至少一种引物上含有第一归一化序列。

12.根据权利要求3或4所述的SNP分型方法，其特征在于，所述接头上含有第二归一化序列。

13.一种基于第二代高通量基因测序技术的SNP分型试剂盒，其特征在于，包括：特异性引物对、固相载体和接头；

所述特异性引物对，用于通过非单分子扩增获得含待测SNP位点的核酸片段；

所述固相载体，用于可寻址固定含待测SNP位点的核酸片段；

所述接头为平末端接头、突出末端接头、分叉接头或含茎环结构的接头，用于连接含待测SNP位点的核酸片段，所述接头上含有修饰标记，用于使含待测SNP位点的核酸片段通过接头间接固定在固相载体上。