[发明专利]EVs-TRPC5在检测乳腺癌耐药程度中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及TRPC5的一种新用途，尤其是涉及细胞外囊泡（EVs）的瞬时受体电位通道（TRPC5）在检测乳腺癌耐药程度中的应用。

背景技术

乳腺癌是女性常见的癌症，严重威胁女性身心健康。中国抗癌协会公布的最

新统计数字显示，从20世纪90年代以来，乳腺癌发病率和死亡率均持续稳定上升，发病率以每年4.476%的速度增长，死亡率以每年3%的速度增长。化学药物治疗是乳腺癌的主要治疗手段之一，目前临床常用药物有：（i）蒽环类，紫杉类，抗代谢类，抗微管类，烷化剂，杂类等；（ii）抗雌激素，芳香化酶抑制剂等；（iii）曲妥珠单抗（抗Her-2）、贝伐单抗（抗VEGF）。

但是，据美国癌症协会报道，90%以上肿瘤患者死于不同程度的化疗耐药。对化疗药物产生耐药已经成为肿瘤治疗的一大难题。经过近几十年的研究，目前发现的耐药机制有（1）细胞膜ABC药物转运蛋白表达增强，减少药物摄入及增加药物排出，P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）是目前研究最多也是最为重要的ABC药物转运蛋白，由多药耐药基因mdr1编码；（2）通过使药物发生异化降低药物活性，常见的酶有GST、CYP450等；（3）药物作用靶点突变或表达水平变化等；（4）肿瘤异质性；（5）肿瘤干细胞耐药等。

目前，早期诊断肿瘤的最新、最有效的方法是通过验血寻找肿瘤标记物。肿瘤标志物指的是在肿瘤发生、发展的过程中，能反应细胞癌变的一些细胞内物质。临床上通过对各种肿瘤标志物的检测，可以对相应肿瘤做早期诊断、检测疗效和肿瘤复发状况。因此，在深入研究耐药机制的基础上，开发乳腺癌耐药分子诊断指标、方法，实现试剂化，达到耐药早期、动态监测，在现阶段对于乳腺癌耐药的诊疗至关重要，也为优化药物结构设计、研发耐药逆转药物提供有益借鉴，因而具有重大而现实的社会价值。

MUC1是一种粘蛋白，在正常细胞表达时是一种跨膜糖蛋白，正常情况下，在乳腺、胃肠道及泌尿生殖道的上皮细胞顶端表达，糖基化完全。MUC1度正常上皮起润滑和保护作用、介导信号转导和细胞黏附。

在乳腺癌细胞株MCF-7中通过磷酸化，MUC1能结合Rrb/SOS，参与受体酪氨酸激酶介导的信号转导，而酪氨酸磷酸化是膜受体参与信号转导的一个关键步骤。乳腺癌MUC1的表达特点包括：高表达、异常表达低；糖基化、高唾液酸化；顶端定为不清，极性混乱；细胞浆和细胞表面都有过度表达，并且这些分子会从乳腺癌细胞进入血清。有研究者检测基底样乳腺癌患者，发现高表达MUC1，大约有92%的患者能检测出过表达的MUC1。

TRPC5是瞬时受体电位通道（transient receptor potential channels，TRP通道）家族的一个亚型，它是细胞膜上能通透钙离子的非选择性通道，主要分布于脑、肺、睾丸和胎盘，并主要参与生长锥的形成和脑的发育。本研究室研究发现，瞬时受体电位通道TRPC5与肿瘤多药耐药密切相关，TRPC5在耐阿霉素的乳腺癌细胞（MCF-7/ADM）中发生明显上调，并能间接介导肿瘤产生多药耐药的P-gp蛋白在多药耐药肿瘤细胞（如MCF-7/ADM）中的表达水平。本申请人针对该性质申请了相关专利，专利名称为《TRPC5作为药物靶点在逆转肿瘤多药耐药中的应用》（专利号：201210318389.5）。

细胞外囊泡（extracellular vesicles，EVs）是指细胞外环境含有大量可移动的细胞膜来源的囊泡。这些EVs主要包括外来体exosomes、微泡microvesicles以及凋亡小体apoptotic bodies，这些动态的EVs在细胞间交流和免疫调节过程中起着至关重要的作用。脂筏标记蛋白flotillin-2在EVs上特异表达，可作为特异性标志物应用于研究过程中。肿瘤细胞也产生EVs，研究者在恶性胶质瘤、胰腺癌、胃癌和急性白血病病人的血液中发现都有大量的EVs存在。这些EVs中包含有细胞表面蛋白、RNA及DNA，通过EVs将囊泡内容物由供体细胞向受体细胞转运，从而介导细胞间交流，进而引发肿瘤的迁移和侵袭，然而这些EVs结构的形成原因及其与乳腺癌化疗耐药的相关性还有待进一步研究。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本申请人提供了一种EVs-TRPC5在检测乳腺癌耐药程度中的应用。本发明根据血液EVs中TRPC5的表达的高低，可显示出乳腺癌肿瘤细胞耐药转变的情况，具有检测方法简单、速度快、灵敏度高、成本低的优点。

本发明的技术方案如下：