[发明专利]一种辣椒素人工半抗原、人工抗原及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种辣椒素人工半抗原、人工抗原及其制备方法，属于免疫化学技术领域。背景技术 

近年来，把非正常食用油(俗称地沟油)掺入合格食用油中以获取利益的行为屡禁不止，严重威胁着消费者的健康，成为当前我国食品安全领域亟须解决的问题。 

国家科技部、工商总局、质检总局、食品药品监管局、粮食局以及中国疾控中心等7部委联合攻关地沟油鉴定方法，主要包括：重金属含量、多环芳烃、胆固醇、3-氯丙二醇及其酯、粘度、电导率、介电常数等，但由于地沟油来源多、成分复杂，现有检测方法不能实现对通过白土吸附脱色、水洗、真空高温脱臭等精炼处理，掺入正常食用油进行销售的新型地沟油进行识别，迄今仍缺乏能够有效鉴别方法。 

我国传统饮食习惯及口味爱好中辣椒是使用量较大、应用范围广泛的调味品，辣椒素是引起辣味的主要化学成分，主要存在于辣椒属植物的果实及种子中。辣椒素具有脂溶性、强稳定性好、沸点高等性质，而餐饮行业的泔水油是地沟油的主要来源之一，目前地沟油加工工艺很难完全去除具有以上性质的化合物。正常食用油基本不含辣椒素，而接触过辣椒的餐厨废弃油脂难以避免地含有这类成分，因此辣椒素能够作为鉴别餐厨废弃油脂的特征指标。现有辣椒素的检测方法主要是高效液相色谱法(HPLC)、液质联用法(LC/MS)，需要对样品进行稀释、过滤、提取、净化，操作复杂、繁琐、检测成本高、周期长，无法满足大批量样品快速筛查，尤其是现场快速检测的要求。免疫分析是基于抗原、抗体的特异性反应的一种分析方法，在医学上已广泛应用于微量物质的检测。免疫分析具有特异性强、灵敏度高、分析容量大、方便快捷、成本低廉等优点，近年来得到迅速发展。 

建立免疫分析方法，首先必须制备出对辣椒素特异性强、亲和力高的抗体。由于辣椒素分子量较小，不具备刺激机体产生针对辣椒素抗原决定簇的特异性抗体，作为小分子抗原其必须与大分子载体偶联后才具有免疫原性。要实现与大分子物质的偶联，半抗原分子上必须具备能共价结合到载体上的活性集团(如氨基、羧基、羟基和巯基等)。影响免疫分析方法的关键因素在于特异的抗原和抗体，因此获得一种可免疫获得特异性好，亲和力高的辣椒素抗体的抗原具有十分重要的意义。 

发明内容

本发明的发明目的是提供一种新型的辣椒素人工半抗原、人工抗原及其制备方法。 

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案。 

本发明提供的辣椒素人工半抗原化合物，具有式Ⅰ所示的分子结构： 

其化学名称为4-[2-甲氧基-4-(壬酰胺甲基)苯氧基]丁酸。 

所提供的辣椒素人工抗原化合物，其分子结构式如式Ⅱ所示： 

按上述方案，所述载体蛋白为牛血清白蛋白BSA、卵清白蛋白OVA或钥孔血蓝蛋白KLH。 

上述特异性辣椒素人工半抗原的合成方法，以N-(4-羟基-3-甲氧基苄基)壬酰胺与4-溴代丁酸乙酯为原料经溴代成醚反应，得到式Ⅲ化合物，然后将其中的酯基团水解制得辣椒素人工半抗原即化合物Ⅰ，合成路线如下： 

按上述方案，所述辣椒素人工半抗原的制备方法，包括以下步骤： 

(1)将摩尔比为1:(1.2～1.5)的N-(4-羟基-3-甲氧基苄基)壬酰胺和4-溴丁酸乙酯分别溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，得到相应的N-(4-羟基-3-甲氧基苄基)壬酰胺溶液和4- 溴丁酸乙酯溶液，然后将4-溴丁酸乙酯溶液置于恒压漏斗，缓慢滴加至N-(4-羟基-3-甲氧基苄基)壬酰胺溶液中，待滴加完毕，在105～110℃条件下反应5-7h，后处理得到中间产物Ⅲ； 

(2)将中间产物Ⅲ在碱性条件下水解，后处理得到辣椒素人工抗原。 

按上述方案，所述步骤(1)的后处理为：将反应液过滤，减压蒸馏除去溶剂得淡黄色的油状物粗产品，然后将该粗产品通过硅胶柱层析，柱层析试剂：体积比为1:1的石油醚和乙酸乙酯混合液，脱色即得。 

按上述方案，所述步骤(2)的后处理为：将反应液用乙醚洗涤，弃去有机相，水相调节PH值3-4，用乙酸乙酯对水液进行萃取，收集有机相，无水硫酸钠过夜，抽滤，减压蒸馏即得。 

上述辣椒素人工抗原的制备，它是将辣椒素人工半抗原通过N,N’-二环己基碳二亚胺DCC与N-羟基琥珀酰亚胺NHS活化后，再与载体蛋白进行偶联得到。 

上述辣椒素人工抗原的制备方法，包括以下具体步骤：