[发明专利]一种全人源抗CTLA-4单克隆抗体、制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种全人源抗CTLA‑4单克隆抗体、制备方法及应用，属于抗体药物开放与生产技术领域。通过构建大容量天然人源噬菌体抗体库，筛选出一种全人源抗CTLA‑4单克隆抗体，对人CTLA‑4分子具有高亲和力和低解离速率(低免疫原性)，相较嵌合的或人源化的抗体，在施用人体时可避免很多副作用。本发明中全人源抗CTLA‑4单克隆抗体的制备方法简单，在动物细胞中高效表达，适用于规模化工业生产。另外，全人源抗CTLA‑4单克隆抗体能显著抑制肿瘤细胞生长，在抗肿瘤、抗感染及治疗自身免疫性疾病方面具有广泛应用前景。

技术领域

本发明涉及一种全人源抗CTLA-4单克隆抗体，以及抗CTLA-4单克隆抗体的制备方法和应用，属于抗体药物开放与生产技术领域。

背景技术

T细胞的激活需两个来自细胞外的信号刺激，即T淋巴细胞活化的双信号作用。T细胞活化的第1信号主要来自T细胞抗原识别受体(TCR)与MHC分子-抗原肽复合物的特异性结合，此过程为抗原识别。T细胞活化的第2信号又称共刺激信号，是由抗原递呈细胞(APC)和T细胞表面的粘附分子对提供。这些粘附分子被称为共刺激分子，其中最重要的是T细胞表面的CD28、CTLA-4以及APC表面的相应配体B7(包括B7-1和B7-2)。

CTLA-4(cytotoxicT lymphocyte associated antigen-4，细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4)蛋白属于免疫球蛋白超家族，在激活的CD4+和CD8+T淋巴细胞及激活的B淋巴细胞表面表达。细胞激活后，CTLA-4依赖CD28在细胞表面表达增强，48-72h后达高峰。CTLA-4与CD28有相同的配体B7-1和B7-2，虽然活化的T细胞表面CTLA-4的数目只有CD28的3％～5％，但CTLA-4与B7的亲和力比CD28强10-50倍。

早期研究提示CTLA-4为T细胞免疫的启动和发展提供共刺激信号，以补充CD28传导的信号。但后来发现CTLA-4与CD28作用相反。体外和体内实验都提示CTLA-4作为CD28的拮抗剂，参与下调T细胞反应。应用抗CTLA-4mAbs的Fab片段，可促进T细胞增生，促进细胞因子表达。阻断CTLA-4还可提高T细胞对普通抗原的反应性，加强超抗原介导的毒性反应，提高机体抗肿瘤、抗寄生虫的能力。CTLA-4下调T细胞反应的直接证据是CTLA-4基因敲除的小鼠出生后2-3周淋巴细胞增生紊乱，出现大量活化的T细胞及自身免疫样的组织结构破坏，出生后3-4周，小鼠全部死亡。CTLA-4不仅可以下调T细胞的反应性，还可调节T细胞的分化。CTLA-4基因缺陷小鼠的CD4+T细胞以Th2细胞反应为特征。体外实验发现CTLA-4可促使幼稚的CD4+T细胞向Th1细胞发展。但有人发现用抗CTLA-4抗体阻断CTLA-4PB7导致Th1细胞介导的自身免疫病的发生。因此，虽然CTLA-4参与调节T细胞的分化，但引起何种结果，目前尚无定论。还有人发现CTLA-4可介导T细胞耐受，阻断CTLA-4可防止耐受的发生。

由于CTLA-4不仅对T细胞活化起负向调节作用，还可介导自身免疫耐受，诱导T细胞分化，维持机体细胞P体液免疫平衡。所以，CTLA-4可能与T细胞介导的自身免疫性疾病、移植排斥反应以及机体抗肿瘤、抗感染、抗过敏能力有关。有望成为肿瘤免疫治疗的有效靶分子，也为HIV和HBV等慢性病毒感染性疾病及自身免疫性疾病的治疗提供一个新的策略。

发明内容

本发明的目的是提供一种全人源抗CTLA-4单克隆抗体。

同时，本发明还提供一种全人源抗CTLA-4单克隆抗体的制备方法。

最后，本发明还提供一种全人源抗CTLA-4单克隆抗体的应用。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：