[发明专利]基于环介导等温扩增技术的胡萝卜成分快速检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种基于环介导等温扩增技术的胡萝卜成分快速检测试剂盒，其特征在于，其中的试剂包括（1）-（4）：

（1）环介导等温扩增反应液A

包括10×Bst buffer反应缓冲液、1-2mmol/L dNTP、5-7mmol/L硫酸镁、0.8-1μmol/L上游内引物、0.8-1μmol/L下游内引物、0.1-0.2μmol/L上游外引物、0.1-0.2μmol/L下游外引物、0.4-0.6μmol/L上游环引物、0.4-0.6μmol/L下游环引物和0.7-0.9mol/L甜菜碱；

其中10×Bst buffer反应缓冲液含有200mmol/L pH8.8的三羟基甲基氨基甲烷-盐酸、100mmol/L氯化钾、100mmol/L硫酸铵、20mmol/L硫酸镁和1％曲拉通X-100；

其中上游内引物的序列为：5'-AACCACCGATGTCGCGATGCCTTTTGTGTGCGGTTGGC-3'；下游内引物的序列为：5'- GTCGTTGTGTATACCCGCCGCGGGTCACAATCGAAGTGCA-3'；上游外引物的序列为：5'- GAAATTGGCCTCCCGTGC-3'；下游外引物的序列为：5'- GCTTAAACTCAGCGGGTAGT-3'；上游环引物的序列为：5'-CGTCACCAGAGACTCATTTTTGA-3'；下游环引物的序列为：5'-GGCCCTTGGGCACAGCAAA-3'；

其中上游内引物、下游内引物、上游外引物、下游外引物、上游环引物、下游环引物体积比为：8:8:1:1:4:4；

（2）Bst DNA聚合酶B：8U/μL；

（3）显色剂C：荧光染料SYBR Green；

（4）阳性对照D：胡萝卜基因组DNA，20ng/μL。

2.一种利用权利要求1所述的试剂盒检测胡萝卜成分的方法，其特征是依次包括下列步骤：

（1）待检样品DNA的提取；

（2）胡萝卜成分的环介导等温扩增：

A. 在装有20μL如权利要求1所述的环介导等温扩增反应液A的反应管中加入1μL Bst DNA聚合酶B和4μL待检样品DNA，混匀；

B. 于恒温水浴上63℃放置40min；

C. 将水浴调到85℃中止反应，5min后取出待检；

扩增时，设立2个对照：阳性对照为胡萝卜基因组DNA、空白对照为不含DNA模板的水；

（3）显色检测

在待检的每个反应管中加入1μL显色剂C，直接用肉眼观察颜色变化。

3.如果样品的扩增反应液颜色变为绿色，说明待检样品含有胡萝卜成分；如果颜色为橙色，则说明待检样品不含有胡萝卜成分。