[发明专利]一种用于少量生物血清中四溴双酚A分析的前处理方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物样品中有机污染物的检测分析技术，特别是涉及分析一种少量生物血清中四溴双酚A含量的样品提取、净化方法。

背景技术

近年来，四溴双酚A作为使用量巨大的溴系阻燃剂之一被广泛应用于家用电器和日常用品中，如计算机、打印机、手机、电视机、洗衣机等电子产品以及纺织品、泡沫家具、建筑材料等。根据欧洲溴科学和环境论坛(Brominated Science and Environmental Forum，BSEF)报告，除约旦、以色列、美国、日本等，我国也是四溴双酚A主要生产国。由于相关产品生产规模的不断增长、含四溴双酚A电子废弃物的不断增加，以及可释放到环境中四溴双酚A数量的增加，使得人们开始关注四溴双酚A潜在的环境污染问题和对人体健康的影响。

调查显示，由于四溴双酚A使用广泛，世界上很多国家和地区的土壤、沉积物、水体和大气等多种环境介质以及生物样品中均检测到四溴双酚A的赋存，且含量较高。由于频繁在环境介质及生物介质中检测出四溴双酚A，使得公众对四溴双酚A的生物毒性倍加关注。目前研究发现四溴双酚A及其代谢产物在生物体反复暴露的情况下具有潜在的生物蓄积性，及细胞、免疫和内分泌干扰等生物毒性。近年来，四溴双酚A被认为是一种值得探讨和关注的潜在内分泌干扰物，也有研究认为四溴双酚A具有潜在环境持久性和生物累积性，可能引起持久性有机污染问题。欧洲保护东北大西洋海洋环境公约组织(OSPAR)自2001年将四溴双酚A纳入优化控制污染物后至今未将其取消，其报告中认为四溴双酚A具有持久性污染问题。基于此，开展四溴双酚A环境与健康方面的研究具有重要意义，特别是研究四溴双酚A在生物体血清中的浓度以及通过动物实验模拟四溴双酚A进入生物体后在血清中的分布规律对四溴双酚A的影响研究具有重要作用。

由于四溴双酚A在生物血清样品中浓度较低，且血清样本基质比较复杂，同时生物血清样品可采集量较小，因此对血清样品前处理技术的要求就变得更加严格。很多样品在分析前没有经过很好的提取以及净化处理，分析时不能准确反应生物血清中四溴双酚A浓度，或者由于基质效应较大影响回收率。因此前处理技术是分析样品中四溴双酚A含量技术的关键，并直接影响四溴双酚A环境健康效应的研究发展。

发明内容

本发明的目的是针对生物血清样品前处理复杂的问题提供一种样品用量少、回收率高、除杂效果好、准确迅速的提取与净化技术，减弱基质干扰作用，实现对少量生物血清样品中四溴双酚A的定量分析。本发明与现有技术的区别在于，采用细胞超声破碎的方式提取血清样品中四溴双酚A，采用含有氧化锆颗粒的固相萃取小柱去除血清中脂类杂质，保证了提取效率并避免复杂的净化步骤损失样品中四溴双酚A含量。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下所述。

一种适用于分析少量生物血清样品中四溴双酚A的前处理方法(图1)，包括以下步骤：

(1)准确移取血清，加入C13标记的四溴双酚A、稀盐酸以及异丙醇；

(2)加入等体积混合的甲基叔丁基醚与正己烷试剂，经细胞超声破碎仪超声提取；

(3)置离心机内低速离心5分钟，移出上层提取液；

(4)重复步骤(2)-(3)两次；

(5)合并三次提取液，转移入分液漏斗；

(6)加入氯化钾溶液充分震荡，静置后分别收集有机相与水相，重复三次；

(7)合并三次收集的水相，加入等体积混合的甲基叔丁基醚与正己烷试剂，充分震荡后，收集有机相；

(8)收集步骤(6)-(7)中产生的有机相，经无水硫酸钠干燥后，至旋转蒸发仪浓缩，转移到已知重量的玻璃离心管，氮气吹干至恒重；

(9)称重含样品的玻璃管，用重量法测定脂肪重量；

(10)称重后样品用甲醇复溶，经含有氧化锆颗粒的Hybrid固相萃取小柱去除脂类杂质，收集流出液体，氮吹仪浓缩至一定体积后，用0.2μm过滤器过滤，过滤后至超高效液相色谱-串联质谱联用仪检测四溴双酚A浓度。

该方法所述生物包括实验动物、野生动物及人群。

本方法步骤(2)中细胞超声破碎仪超声强度为25％，超声4秒，停止3秒，共7分钟后移除提取液，重复三次。