[发明专利]生产香紫苏醇的方法

权利要求书

1.一种生产香紫苏醇的方法，包括：

(a)使焦磷酸赖百当烯二醇酯与具有香紫苏醇合酶活性的多肽接触，该多肽的氨基酸序列与SEQ ID NO:1有至少98％的同一性，并且该多肽源自快乐鼠尾草(Salvia Sclarea)；并且

(b)非强制性选择地将步骤(a)中生产的香紫苏醇分离。

2.权利要求1的方法，其中步骤(a)通过在有助于香紫苏醇生产的条件下培养能生产焦磷酸赖百当烯二醇酯并经转化以表达所述多肽的非人生物体或细胞而进行。

3.权利要求2的方法，还包括在步骤(a)之前，用编码所述多肽的核酸来转化该能生产焦磷酸赖百当烯二醇酯的非人生物体或细胞，从而所述生物体表达所述多肽。

4.权利要求2或3的方法，其中所述非人生物体是植物、原核生物或真菌。

5.权利要求2或3的方法，其中所述非人生物体是微生物。

6.权利要求5的方法，其中所述微生物是细菌或酵母。

7.权利要求6的方法，其中所述细菌是大肠杆菌(E.coli)，所述酵母是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。

8.权利要求2或3的方法，其中所述非人细胞是从植物细胞或真菌细胞中选出的高等真核细胞。

9.分离的多肽，该多肽具有香紫苏醇合酶活性并且该多肽的氨基酸序列与SEQ ID NO:1有至少98％的同一性，并且该多肽源自快乐鼠尾草。

10.分离的核酸，其编码权利要求9的多肽，并且该核酸源自快乐鼠尾草。

11.权利要求10的分离的核酸，该核酸的核苷酸序列与SEQ ID NO:2或其互补序列有至少98％的同一性。

12.表达载体，该表达载体包含权利要求10或11的核酸。

13.权利要求12的表达载体，其形式为病毒载体、噬菌体或质粒。

14.权利要求12或13的表达载体，该表达载体包括权利要求10或11的核酸，所述核酸可操作地连接至至少一条控制转录、翻译的起始或终止的调控序列，并非强制性选择地包括至少一个选择标记。

15.权利要求14的表达载体，其中该调控序列为转录启动子、操作子或增强子或mRNA核糖体结合位点。

16.非人生物体，其用权利要求12～15中任一项的表达载体转化，从而包藏权利要求10或11的核酸并异源表达或过表达权利要求9的多肽，其中所述非人生物体是原核生物或真菌。

17.非人生物体，其用权利要求12～15中任一项的表达载体转化，从而包藏权利要求10或11的核酸并异源表达或过表达权利要求9的多肽，其中所述非人生物体是微生物。

18.权利要求17的非人生物体，其中所述微生物是细菌或酵母。

19.权利要求18的非人生物体，其中所述细菌是大肠杆菌，所述酵母是酿酒酵母。

20.真菌细胞，其用权利要求12～15中任一项的表达载体转化，从而包藏权利要求10或11的核酸并表达权利要求9的多肽。

21.生产具有香紫苏醇合酶活性的至少一条多肽的方法，包括：

(a)培养用权利要求12～15中任一项的表达载体转化的非人生物体或细胞，从而使其包藏权利要求10或11的核酸并表达或过表达由所述核酸编码并具有香紫苏醇合酶活性的多肽；

(b)将该具有香紫苏醇合酶活性的多肽从步骤(a)中培养的非人生物体或细胞中分离。

22.权利要求21的方法，还包括在步骤(a)之前，用权利要求12～15中任一项的表达载体转化非人宿主生物体或细胞，从而使其包藏权利要求10或11的核酸并表达或过表达由所述核酸编码的多肽。

23.制备具有香紫苏醇合酶活性的变体多肽的方法，包括步骤：

(a)选择权利要求10或11的核酸；

(b)修饰所选择的核酸以获得至少一种不具有肽信号的突变核酸；

(c)用该突变核酸序列转化宿主细胞或单细胞生物体以表达由该突变核酸序列编码的多肽；

(d)对该多肽进行香紫苏醇合酶活性的筛选；并且

(e)非强制性选择地，如果该多肽不具备想要的变体香紫苏醇合酶活性，则重复步骤(a)至(d)直至获得具有所需变体香紫苏醇合酶活性的多肽；

(f)非强制性选择地，如果在步骤(d)中鉴别出具有所需变体香紫苏醇合酶活性的多肽，则分离在步骤(c)中获得的相应突变核酸。