[发明专利]检测化妆品中常见致病菌的基因芯片和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种基因芯片和检测用试剂盒，尤其涉及检测化妆品中常见致病菌的基因芯片和试剂盒。

背景技术

最近几年以来，为了满足消费者的需求，化妆品生产商在提高功效和回归大自然的同时，在化妆品中加入了来自植物、动物中的营养成分，另外化妆品中还含有氨基酸、蛋白质、脂肪、维生素、无机盐和胎盘液等营养成分，为细菌、真菌等各种致病菌的生长、繁殖提供了足够的营养成分，因此化妆品特别容易受到微生物的污染。除此之外、pH 4-7也是微生物生长最适宜的条件，另外，化妆品在生产、储存和日常使用过程中都是室温放置，室温也是微生滋生和繁殖的适宜温度。微生物的生长需要水分，它是决定微生物能否生长和生长快慢的重要因素。微生物细胞的主要成分就是碳源，微生物细胞内的核酸和蛋白质的重要位置是氮源，另外微生物的生长还需要矿物元素，包括钾、磷、钠、镁、铁等成分，另外微生物所需的生长因子都是维生素类，在化妆品中含量丰富。因此化妆品里含的营养为微生物生长提供了一切条件，就是微生物生长的摇床。

妆品中受到污染以后，会发生各种变质现象，影响化妆品的质量。微生物新陈代谢后分泌色素，比如霉菌代谢产生的色素，可以是化妆品变成黑色、黄色产生霉斑等各种颜色。另外微生物代谢有时产生的硫物质，胺物质等会发出酸臭味，使原本芬芳的气味发出难闻的气味。另外，微生物污染化妆品生长过程中，分解蛋白质、氨基酸、酶类等，是化妆品的理化结构发生变化，腐败变质不能使用。如果污染的微生物是致病菌，在使用的过程中，还会感染消费者，严重危害身体健康。致病菌生长过程中会产生代谢产物和各种毒素，这些产物在人体免疫系统的识别下，可以变成刺激源和变应原，使使用者产生过敏或者受到感染，引起各种各样的皮肤病，比如肤色异常、接触性和光感性皮炎，掉头发，头发粗糙，痤疮等皮肤病。

根据文献参考以及调查，我们选取了12种化妆品中常见的致病菌，包括白色念珠菌（Candida albicans），新生隐球菌（Cryptococcus neoformans），志贺氏菌（Shigella），藤黄微球菌（Micrococcus luteus），金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），化脓链球菌（Streptococcus pyogenes），沙门氏菌（Salmonella），奇异变形杆菌（Proteus mirabilis），弗氏柠檬酸杆菌（Citrobacter freundii），铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa），产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes），斯氏普罗威登斯菌（Providencia stuarti）。

化妆品经过一次污染和二次污染，致病菌就会进入到化妆品中，而且化妆品为微生物的生长提供了足够的营养和水分，是微生物生长的温床。污染化妆品的微生物主要包括真菌和细菌，一般霉菌不致病，细菌主要是大肠杆菌群，金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌等。被污染的化妆品就会引起消费者面部器官、皮肤的感染，更严重的引起全身感染，致病菌通过皮肤的破损处或者口腔进入到人体内。传统的病原菌鉴定主要是生化鉴定和血清型分型，这些方法可以很准确的鉴定微生物，但是操作时间太长，操作也比较复杂，需要耗费大量的人力和物力。随着技术的发展，也有一些新的技术涌现，包括实时定量聚合酶链反应、限制性片段长度多态性分析、单链构象多态性分析、荧光原位杂交、质谱技术、免疫技术等，这些方法与传统方法比，操作更简单，更快速。

（1）实时定量聚合酶链反应

实时荧光定量PCR ( real-time fluorescentquantitative polymerase chain reaction)，就是在简单的PCR反应过程中加入荧光染料或者荧光探针，利用PCR过程中荧光的变化量，用机器实时监测PCR中产物的扩增量，实现定量的目的。Richardson等人就利用荧光定量PCR技术了鉴定了314株分枝杆菌菌株，灵敏度可以高达95%以上，这位临床治疗结核病奠定了基础。与传统方法比较发现，实时荧光定量PCR的重复性比较好，灵敏度比较高，特异性也比较高。而且PCR扩增过程中就可以完成分析，避免了外界的污染。整个过程比较快，从提取模板到结果分析，只需要8个小时左右。但是它也有缺点，检测比较单一，实际样品中致病菌的种类繁多，所以实时荧光定量PCR还有局限性。

（2）限制性片段长度多态性分析