[发明专利]太子参环肽B标准品的制备方法

权利要求书

1.太子参环肽B标准品的制备方法，包括以下步骤：

（1）提取：太子参药材晒干，粉碎至粒径20-80目，加入太子参药材4-10倍体积的95%工业乙醇进行热回流提取，合并提取液、浓缩至比重为1.1-1.2的浸膏；

（2）前处理：向浸膏中加入5-15倍体积的95%工业乙醇热回流溶解1-3h，冷却静置8-24h，过滤浓缩滤液，得到太子参环肽总提物；

（3）富集：将上述太子参环肽总提物用少量甲醇溶解，拌入拌样用柱层析硅胶，干燥，加载于分离用层析硅胶柱床顶端，用氯仿-甲醇溶剂梯度洗脱，收集流出液，TLC检测环肽成分，合并所有环肽部分，回收溶剂，干燥得到太子参环肽B粗品，HPLC-MS分析，快速锁定目标产物；

（4）分离纯化：取上述富集产物，甲醇溶解过滤，用制备型高效液相色谱进行跟踪分离纯化，流动相为乙腈-水溶液，根据HPLC-MS分析结果，收集太子参环肽B色谱峰流出液，回收溶剂，干燥得到纯度98%以上的太子参环肽B纯品。

2.按照权利要求1所述的太子参环肽B标准品的制备方法，其特征在于所述的步骤（1）中太子参为石竹科植物孩儿参Pseudostellaria heterophylla(Miq.)Pax ex Pax et Hoffm.的干燥块根。

3.按照权利要求1所述的太子参环肽B标准品的制备方法，其特征在于所述的步骤（1）中热回流提取所用溶剂为原料4-10倍体积的95%工业乙醇，提取时间2-4h，温度75-85℃，每次过滤后将残渣重复提取过程2-3次，合并提取液，减压浓缩至比重1.1-1.2。

4.按照权利要求1所述的太子参环肽B标准品的制备方法，其特征在于所述的步骤（2）中前处理所用溶剂为浸膏5-15倍体积的95%工业乙醇，热回流溶解时间为1-3h，温度75-85℃，冷却静置时间为8-24h。

5.按照权利要求1所述的太子参环肽B标准品的制备方法，其特征在于所述的步骤（3）中富集目标产物所用层析柱为硅胶柱，装柱方法为湿法装住，所用装柱硅胶为200-300目柱层析硅胶，用量为太子参环肽总提物的15-40倍重量，上样方法为干法上样，拌样用硅胶为100-200目柱层析硅胶，用量为太子参环肽总提物的1-1.5倍重量，洗脱溶剂为氯仿-甲醇溶剂梯度洗脱：20-40:1(6-14BV)，6-12:1(6-14BV)。

6.按照权利要求1所述的太子参环肽B标准品的制备方法，其特征在于所述的步骤（3）中TLC检测环肽所用薄层板为硅胶G板，样品点于硅胶G板上，用8:2-9:1的氯仿-甲醇展开，挥掉溶剂后，在100-120℃用4-8N HCl溶液水解30-60min后，再喷洒2%-5%茚三酮乙醇溶液显色剂，加热后显桔黄色至橙红色斑点。

7.按照权利要求1所述的太子参环肽B标准品的制备方法，其特征在于所述的步骤（3）中HPLC-MS分析方法：HPLC色谱条件为：色谱柱：C18柱，柱温：室温，流动相：乙腈-水，乙腈在流动相中的比例为：0-20min，20%-32%；20-40min，32%；40-50min，32%-45%，流速：1.0ml/min，检测：DAD检测器，检测波长：203nm；质谱条件为：电离方式为电喷雾离子源正离子模式，喷雾电压3kV，椎孔电压42V，离子源为450℃，雾化气流速650L/Hr，辅助气流量50L/Hr，碰撞能量38V，0.2秒内的质量扫描范围为m/z100-1000。

8.按照权利要求1所述的太子参环肽B标准品的制备方法，其特征在于所述的步骤（4）中制备型高效液相色谱分离纯化所用色谱柱为：C18柱，流动相为乙腈-水体系，乙腈在流动相中的比例为0-20min：15-32%，20-40min：32%，检测波长203nm。