[发明专利]一种基于测序法检测β-酪蛋白基因型的方法在审
| 申请号： | 201410177384.4 | 申请日： | 2014-04-29 |
| 公开（公告）号： | CN105018581A | 公开（公告）日： | 2015-11-04 |
| 发明（设计）人： | 孙子奎;高文学;丁方美;王锋;方钰 | 申请（专利权）人： | 上海桑尼生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201401 上海市嘉*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 测序法 检测 蛋白 基因型 方法 | ||
1.一种基于测序法检测β-酪蛋白基因型的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
根据β-酪蛋白的碱基序列，在6号内含子和7号内含子上设计出一对引物，用引物扩增出7号外显子的片段，所述7号外显子的片段大小为759bp，所述引物的序列为：
上游引物：5’ACC CCA ATT TCT TAA CCA AAC C3’
下游引物：5’CTC AGC TAT GCT TAT TTT GGA ACC3’；
用引物对待检测的奶牛基因组DNA进行PCR扩增；
PCR产物用胶回收试剂盒纯化后，用测序仪进行测序，根据测序分型结果进行判断β-酪蛋白的基因型。
2.根据权利要求1所述基于测序法检测β-酪蛋白基因型的方法，其特征在于，根据测序分型结果进行判断β-酪蛋白的基因型，具体为：
如果β-酪蛋白的67位氨基酸为组氨酸或密码子为CAT,则β-酪蛋白为A1β-酪蛋白；
如果β-酪蛋白的67位氨基酸为脯氨酸或密码子为CCT,则β-酪蛋白为A2β-酪蛋白；
如果β-酪蛋白的67位氨基酸为一个杂合子或序列为CC/AT,则β-酪蛋白为A1A2β-酪蛋白。
3.根据权利要求2所述基于测序法检测β-酪蛋白基因型的方法，其特征在于，所述A2β-酪蛋白的106位氨基酸的密码子为CAC。
4.根据权利要求2所述基于测序法检测β-酪蛋白基因型的方法，其特征在于，所述A2β-酪蛋白的122位氨基酸的密码子为AGC。
5.根据权利要求1至4任一所述基于测序法检测β-酪蛋白基因型的方法，其特征在于，所述PCR扩增的体系为DNA模板50ng、热启动Taq DNA聚合酶0.1Μ/μl、2.5μM dNTP2μl、10μM上下游引物各1μl、2×Lengend PCR Bμffer10μl、加ddH2O至50μl。
6.根据权利要求5所述基于测序法检测β-酪蛋白基因型的方法，其特征在于，所述PCR扩增的条件：在温度为92-95℃时预变性5min，然后在温度为92-95℃时变性15s、在温度为52-68℃时退火30s、在温度为68-72℃时延伸30s，进行多个循环，最后在温度为68-72℃时延伸7min。
7.根据权利要求6所述基于测序法检测β-酪蛋白基因型的方法，其特征在于，所述PCR扩增进行35个循环。
8.根据权利要求7所述基于测序法检测β-酪蛋白基因型的方法，其特征在于，所述PCR扩增的条件：在温度为95℃时预变性5min，然后在温度为95℃时变性15s、在温度为63℃时退火30s、在温度为72℃时延伸30s，进行35个循环，最后在温度为72℃时延伸7min。
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