[发明专利]一种蜈蚣藻寡糖及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于天然药物技术领域，具体说，是涉及一种蜈蚣藻寡糖及其制备方法和应用。

背景技术

蜈蚣藻(Grateloupia filicina C.Ag.)属于红藻门、真红藻纲、隐丝藻目、海膜科、蜈蚣藻属藻类，自古以来就作为一种海洋中药，具有清热解毒和驱虫之功效，并且资源丰富，在全国沿海均有着广泛的分布，并被当地人们所食用。多糖作为蜈蚣藻的主要化学成分，以半乳聚糖硫酸酯为主，国内外的研究充分表明蜈蚣藻多糖具有良好的抗凝血、抗病毒、抗肿瘤等多种生物活性，说明其有较大的开发利用价值。较多糖而言，寡糖具有分子量较小、结构简单、质量易控及良好的成药性等特点。但是到目前为止，未见有关蜈蚣藻寡糖及其活性研究的相关报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于：提供一种具有确切结构的蜈蚣藻寡糖G19及其制备方法和应用，以拓宽蜈蚣藻的应用。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种蜈蚣藻寡糖，其分子式为C₄₈H₇₆O₅₂S₄Na₄，由一个4-硫酸基-β-D-半乳糖非还原末端以及3个1,4-β-D-半乳糖和3个4-硫酸基-1,3-β-D-半乳糖交替链接而成，并以一个3,6-脱水-1,4-D-半乳糖为还原末端，其化学结构如下：

一种制备本发明所述的蜈蚣藻寡糖的方法，是先将蜈蚣藻多糖进行酸性水解，然后进行分离纯化。

作为一种优选方案，所述制备方法具体包括如下步骤：

a)制备蜈蚣藻多糖；

b)将步骤a)得到的蜈蚣藻多糖先用盐酸溶液在60～100℃下进行水解，将水解液用氢氧化钠溶液中和后浓缩、醇沉、离心去除蜈蚣藻多糖沉淀，收集上清液进行干燥；

c)将步骤b)得到的残渣溶于水中，进行柱层析，依次用水、0.02～0.1mol/L NaCl溶液和1.5～2.5mol/L NaCl溶液洗脱，收集各部分洗脱液；

d)将步骤c)得到的0.05mol/L NaCl溶液洗脱部分经脱盐后进行柱层析，然后依次用水、0.01mol/L NaCl溶液和1.0～2.0mol/LNaCl溶液进行洗脱，收集洗脱液，绘制洗脱曲线，按出峰先后顺序将0.01mol/L NaCl溶液洗脱部位分成A和B两部分；

e)将步骤d)得到的A部分洗脱液干燥后加水溶解，然后离心取上清液进行柱层析，用0.15～0.2mol/L NaCl溶液洗脱，收集相对保留时间为0.88～0.91之间的组分；

f)将步骤e)所得相对保留时间为0.88～0.91的组分再次进行柱层析纯化，即得所述的蜈蚣藻寡糖，简记为G19。

作为进一步优选方案，步骤b)中所述盐酸溶液的浓度为0.01mol/L，所述氢氧化钠溶液的浓度为2mol/L。

作为进一步优选方案，步骤c)中柱层析所用的色谱柱为Q Sepharose Fast Flow强阴离子交换凝胶柱；步骤d)中柱层析所用的色谱柱为Sephadex G10凝胶柱；步骤e)和步骤f)中柱层析所用色谱柱均为Superdex30葡聚糖凝胶柱。

本发明所述的蜈蚣藻寡糖(G19)可作为活性成分之一或唯一活性成分用于制备抗肿瘤药物；所述的肿瘤包括神经胶质瘤、肝癌、胰腺癌、肺腺癌等。

本发明从蜈蚣藻中分离纯化得到蜈蚣藻寡糖G19，而且实验证明：本发明提供的蜈蚣藻寡糖G19能够在体外及体内抑制肿瘤细胞的生长，但不影响正常肝细胞的生长，且研究表明蜈蚣藻寡糖G19的这一抑制作用与肿瘤细胞周期阻滞及肿瘤细胞凋亡相关，因此，本发明提供的蜈蚣藻寡糖G19具有开发成低毒高效的抗肿瘤药物的潜在价值。

附图说明

图1为蜈蚣藻寡糖G19特征液相色谱图；

图2为蜈蚣藻寡糖G19糖组成分析特征气质联用总离子流图；

图3为蜈蚣藻寡糖G19绝对构型分析特征气质联用总离子流图，A为G19总离子流图，B为标准品总离子流图；

图4为蜈蚣藻寡糖G19特征红外光谱图；

图5为蜈蚣藻寡糖G19特征¹H-NMR图谱；

图6为蜈蚣藻寡糖G19的¹³C-NMR测试图谱，其中，A为G19的¹³C-NMR特征图谱，B为Dept135图谱；

图7为蜈蚣藻寡糖G19特征1H-1H COSY图谱；