[发明专利]B族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡及其制备方法

说明书

技术领域

本发明公开了一种检测试剂卡，具体的说是，一种测定孕妇宫颈或者阴道中B族链球菌的检测试剂卡，本发明还公开了该检测试剂卡的制备方法，属于荧光量子点标记免疫检测领域。

背景技术

B族链球菌(Group B Streptococcus，简称GBS)可引起新生儿败血症、肺炎、脑膜炎，甚至死亡。在感染后存活的新生儿，还有可能有严重的神经系统后遗症，包括脑积水、智力障碍、小头畸形、耳聋等。同时，B族链球菌还可引起孕妇感染、引起早产、胎儿发育不良(低体重儿)、胎膜早破及晚期流产。因此，对孕妇B族链球菌的检测非常重要和必须。目前，B族链球菌的检测主要有以下三种方法：

1、传统的细菌培养检测法，该方法的检测结果较准确，但检测时间较长，一般需2-3天才能出来结果，效率较低；

2、PCR检测法，该检测方法简便快速，灵敏度较高，但是，检测时，容易导致交叉扩增反应，从而出现假阳性结果，所以，需要专业的技术人员和特殊的仪器设备，因此，该方法的应用范围受到很大的限制。

3、胶体金检测法，该方法操作简单，但是灵敏度低，特别是感染量少的话，可能会出现漏检、误检的情况，这样给胎儿的优生优育带来严重的危害。

发明内容

针对上述不足，本发明的目的在于提供一种检测方法简单、快速，灵敏度高，检测结果可靠的B族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡。

为解决上述技术问题，本发明的提供的前一技术方案是这样的：该B族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡，包括带盒盖的盒体，盒体内设有检测试纸，所述的检测试纸包括底板，底板上依次衔接有样品垫、抗B族链球菌抗体量子点标记垫、包被膜和吸水垫，所述的包被膜上设有一条B族链球菌抗体检测区T线和一条羊抗兔多克隆抗体质控区C线，两条线平行排列。

进一步的，上述的B族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡，所述的盒体的盒盖上设有加样孔和结果观察窗口。

进一步的，上述的B族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡，所述的包被膜两端分别与吸水垫和抗B族链球菌抗体量子点标记垫相互交叠连接，在抗B族链球菌抗体量子点标记垫上压贴有样品垫。

进一步的，上述的B族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡，所述的样品垫为玻璃纤维样品垫。

进一步的，上述的B族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡，所述的包被膜为硝酸纤维素膜。

进一步的，上述的B族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡，所述的抗B族链球菌抗体量子点标记垫为包被量子点标记B族链球菌抗体的聚酯纤维素膜。

本发明的后一技术方案是提供该B族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡的制备方法，该方法依次包括下述步骤：在底板上依次衔接有样品垫、抗B族链球菌量子点标记垫、包被膜和吸水垫：

其中：

1)样品垫的制备方法是：将样品垫裁成20mm×300mm的大小，浸泡在样品垫缓冲液中，1小时之后取出，于室温干燥16-18小时。

样品垫的缓冲液配方如下：2％BSA、1％PVP、0.5％Tween溶解于0.01的PBS(pH7.4)缓冲液中。

2)抗B族链球菌抗体量子点标记垫的制备方法是：

①用10mM pH8.4的硼酸缓冲液(2.5mM硼砂：10mM硼酸＝4.5:5.5(V:V))将水溶性羧基量子点8μM的QD525稀释至1μM；加入30μL10mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸溶液，室温反应1～2小时。用30kDa的超滤管超滤，除去未反应的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸，吸取超滤管内剩余液体，加上述缓冲液恢复为原体积。

②将抗B族链球菌抗体加入100kDa的超滤管中，用0.05M的pH8.4的硼酸缓冲液将抗体浓度调整为4mg/mL。

③按200μg/1mL的量，将步骤②制备的抗体加入到步骤①量子点溶液中，室温反应1～2小时；

④按10μL/1mL的量，向步骤③中加入甘氨酸，封闭未偶联抗体的活化羧基位点，反应30～60min；

⑤将偶联抗体的量子点溶液加入到30kDa的超滤管中，加入pH9.0浓度0.05M Tris-HCl溶液置换溶液缓冲体系。重复3～5次，恢复终体积为100μL。

⑥将步骤⑤中的在溶液4℃1800g离心取上清液；

⑦在步骤⑥所得的上清液中加入100μL抗体保存液，所述的保存液为含1wt％BSA，20wt％蔗糖，10wt％海藻糖，0.1wt％吐温-20和0.1wt％聚乙烯吡咯烷酮的0.05M Tris-HCl缓冲液。