[发明专利]一种高油脂含量的四尾栅藻及其构建方法

权利要求书

1.一种高油脂含量的四尾栅藻，其特征在于高油脂含量的四尾栅藻中含有人工DGAT1基因，人工DGAT1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.权利要求1所述高油脂含量的四尾栅藻的构建方法，其特征在于高油脂含量的四尾栅藻按以下步骤构建：

一、用质粒pMD19-T载体和人工DGAT1基因构建质粒pMD-DGAT1；

二、提取质粒pMD-DGAT1和质粒pBI121分别用Xba I和BamH I进行双酶切，回收目的基因人工DGAT1基因和载体pBI121，然后连接人工DGAT1基因和载体pBI121，获得重组质粒pBI121-DGAT1；

三、取培养至对数中期的四尾栅藻藻液放入离心管中8000r/min离心5min收集藻体细胞并用预冷的渗透液洗涤藻体，然后加入渗透液冰上放置1h，再8000r/min离心5min，重悬直至四尾栅藻细胞密度达到10⁸cells/mL；然后将四尾栅藻悬液放入水浴锅中42℃热激10min、冰浴5min并沿管壁加入重组质粒pBI121-DGAT1与鲑精DNA，之后吹打混匀置于冰上10min，再用脉冲电压为1500v、脉冲持续时间为2ms的脉冲电击；

四、将步骤三电击转化的四尾栅藻细胞用微藻培养液清洗两次，再置于微藻培养液中于22～25℃黑暗环境中培养24h，即获得高油脂含量的四尾栅藻；

其中，步骤一中人工DGAT1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

3.根据权利要求2所述的高油脂含量的四尾栅藻的构建方法，其特征在于步骤二用获得的重组质粒pBI121-DGAT1转化感受态细胞大肠杆菌DH5α，然后进行蓝白斑筛选，挑选白色菌落进行PCR验证和酶切验证。

4.根据权利要求2所述的高油脂含量的四尾栅藻的构建方法，其特征在于步骤三中渗透液中甘油的体积浓度为10％、甘露醇的浓度为0.2mol/L、山梨醇的浓度为0.2mol/L。

5.根据权利要求2所述的高油脂含量的四尾栅藻的构建方法，其特征在于步骤三中鲑精DNA的终浓度为25μg/mL。

6.根据权利要求2所述的高油脂含量的四尾栅藻的构建方法，其特征在于步骤四中微藻培养液为BG11液体培养基。

7.根据权利要求2所述的高油脂含量的四尾栅藻的构建方法，其特征在于步骤四中将获得的高油脂含量的四尾栅藻涂布于含有0.3mg/ml卡那霉素的BG11固体培养基平板上，未加重组质粒的四尾栅藻同样处理作为对照；15天后挑取在卡那霉素固体培养基平板上长出的转化子四尾栅藻群落转接于含有0.3mg/ml卡那霉素的液体培养基中，继续培养15天后转接到没有抗生素的固体培养基上，隔代在抗生素与无抗生素的培养基中进行交替培养，获得性状稳定的高油脂含量的四尾栅藻。