[发明专利]一种从獐芽菜中提取苦龙胆酯甙的方法

权利要求书

1.一种从獐芽菜中提取苦龙胆酯甙的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)取獐芽菜粉，加入其质量8～12倍的中性磷酸盐缓冲液，充分混匀后得到獐芽菜粉悬浊液，将獐芽菜粉悬浊液冻融2～4次，在15～20℃下，离心除去杂质，得到滤液；

2)将滤液除水后，在15～20℃下，向除水后的剩余物中加入硫酸铵饱和溶液，沉降5～8h后，离心分离得到苦龙胆酯甙粗品；

3)柱层析硅胶的预处理：取200-300目柱层析硅胶，加入氯仿、甲醇体积比为9:1的混合溶剂，搅拌至没有气泡后倒入玻璃层析柱中，沉降，得到硅胶层析柱。

4)将苦龙胆酯甙粗提取物用乙醇溶解，加入3倍粗提取物重量的200-300目硅胶，拌匀，挥去溶剂晾干，粉碎过200目筛，加入到含有粗提取物30倍重量柱层析硅胶的硅胶层析柱上，采用氯仿、甲醇体积比为9：1的混合溶剂做洗脱剂洗脱，以苦龙胆酯甙纯品做对照，采用薄层层析法跟踪检测，待苦龙胆酯甙呈现单一斑点时收集洗脱液，直至洗脱液中再次出现其它斑点时停止收集。

5)将收集的洗脱液挥干溶剂得到纯化的苦龙胆酯甙。

2.根据权利要求1所述的一种从獐芽菜中提取藻蓝蛋白的方法，其特征在于：将干燥后的獐芽菜粉碎，过20目筛，得到獐芽菜粉。

3.根据权利要求1所述的一种从獐芽菜中提取苦龙胆酯甙的方法，其特征在于：所述中性磷酸盐缓冲液为水、氢氧化钠和磷酸二氢盐组成的缓冲液，调节缓冲液pH值为6.8～7.5。

4.根据权利要求3所述的一种从獐芽菜中提取苦龙胆酯甙的方法，其特征在于：所述的磷酸二氢盐为磷酸二氢钾或磷酸二氢钠。

5.根据权利要求1所述的一种从獐芽菜中提取苦龙胆酯甙的方法，其特征在于：步骤1)所述的充分混匀为搅拌1～3h。

6.根据权利要求1所述的一种从獐芽菜中提取苦龙胆酯甙的方法，其特征在于：步骤2)所述硫酸铵饱和溶液的用量为除水后的剩余物质量的0.5～2倍。

7.根据权利要求1所述的一种从獐芽菜中提取苦龙胆酯甙的方法，其特征在于：步骤2)所述的除水采用冰冻除水法。

8.根据权利要求7所述的一种从獐芽菜中提取苦龙胆酯甙的方法，其特征在于：所述的冰冻除水是采用缓慢降温的方法，降温速率为4～6℃/h，在降温过程中将形成的冰块除去，降温的温度最低极值设定为0℃。

9.根据权利要求1所述的一种从獐芽菜中提取苦龙胆酯甙的方法，步骤2)中洗脱完毕后采用乙醇冲柱，柱层析硅胶可重复使用两次。