[发明专利]一种pEGF基因工程乳酸乳球菌的发酵优化培养基

说明书

技术领域

本发明属于微生态学，微生物发酵领域，更具体涉及一种可显著提高pEGF基因工程乳酸乳球菌生物量的发酵培养基。

技术背景

猪表皮生长因子（porcine epidermal growth factor ,pEGF）是表皮生长因子的一种，是猪乳中含量最丰富的生长因子之一。在猪初乳和常乳中表皮生长因子浓度含量很高，且其受体在猪小肠的分布研究得最多，EGF与其受体结合可发挥生理功能。有研究表明猪表皮生长因子具有多种生物学功能，如可刺激表皮和内皮细胞的增殖；可刺激胃肠道的生长以及诱导小肠消化酶的表达。对于初生的仔猪和早期断奶仔猪，pEGF能够影响其生产性能、免疫应答和小肠的发育，诱导小肠消化酶的表达。此外，pEGF 具有促进静止期的初级母卵泡变成活化卵泡，从而加速卵子的排出，因此具有提高哺乳动物的窝产仔数的功能。

乳酸乳球菌是一类能够代谢糖类，产生50%以上乳酸的细菌通称，包括乳酸乳球菌属、乳球菌属、双歧杆菌属、明串珠菌属等至少23个属。 其本身具有调节肠道微生态，促进营养成分在肠道的消化吸收，降低血清中的胆固醇含量，缓解高血压以及抗肿瘤作用。乳酸乳球菌为兼性厌氧菌是全球公认的食品级微生物，随着分子生物学技术的不断发展，通过基因重组对其改造，有目的、有选择地使乳酸乳球菌产生有益的异源基因的产物，制成微生态制剂和活菌疫苗等保健品或药品，是乳酸乳球菌分子生物学研究的一个重要方向。

随着基因工程技术的飞速发展，我们可以通过对乳酸乳球菌质粒编码特性的研究来构建我们所需要的质粒载体，通过一系列分子生物学手段例如转导、结合、电转化等，将其转移到乳酸乳球菌中，使我们所需要的目的基因得以表达，从而使基因工程乳酸乳球菌集菌体、自身分泌物、外源蛋白于一体。将基因工程乳酸乳球菌应用到饲料中，可以作为一种新型的饲料添加剂，其能够产生抗微生物(尤其致病菌)物质，还能够调节动物机体肠道内的微生态平衡，增强动物机体免疫力，从而促进动物生长，提高饲料转化率。

发明内容

本发明提供了一种可以显著提高pEGF基因工程乳酸乳球菌生物量的发酵优化培养基。

本发明中，所述的发酵培养基有如下组分组成：

    1）低蛋白乳清粉6.5~15g/L;

    2) 无水葡萄糖5~20g/L;

    3）蛋白胨5~15g/L;

    4）牛肉膏1~10g/L;

    5）酵母浸出粉1~5g/L;

6）维生素C 0.1~0.5g/L;

7）硫酸镁0~0.25g/L;

8）硝酸钠0~2g/L;

9）硫酸亚铁0~0.4g/L;

10)所述发酵优化培养基的pH值为5.8-7.0；所述发酵优化培养基的培养时间为24~39h；所述发酵优化培养基的接种量为2%~10%；所述发酵优化培养方式为静置培养；所述发酵培养温度为37℃。

本发明中，所述的发酵培养基中含有低蛋白乳清粉6.5~15g/L；较佳地，所述的发酵优化培养基中含有低蛋白乳清粉6.5g/L。

本发明中，所述的发酵培养基中含有无水葡萄糖5~20g/L；较佳地，所述的发酵优化培养基中含有无水葡萄糖5g/L。

本发明中，所述的发酵培养基中含有蛋白胨5~15g/L；较佳地，所述的发酵优化培养基中含有蛋白胨15g/L。

本发明中，所述的发酵培养基中含有牛肉膏1~10g/L；较佳地，所述的发酵优化培养基中含有牛肉膏1g/L。

本发明中，所述的发酵培养基中含有酵母浸出粉1~5g/L；较佳地，所述的发酵优化培养基中含有酵母浸粉1g/L。

本发明中，所述的发酵培养基中含有维生素C0.1~0.5g/L；较佳地，所述的发酵优化培养基中含有维生素C0.1g/L。

本发明优选地，所述的发酵优化培养基中含有硫酸镁0.25g/L；所述的硝酸钠2g/L；所述的硫酸亚铁0.4g/L。

本发明优选地，所述的发酵优化培养基pH值为7.0；所述的发酵培养时间为27h；所述的接种量为10%；所述的培养方式为厌氧静置培养；所述的发酵培养温度为37℃。

本发明更优选地，所述的发酵优化培养基由如下组分组成：每1L培养基含低蛋白乳清粉6.5g，葡萄糖5g，蛋白胨15g，牛肉膏1g，酵母浸粉1g，维生素C0.1g,硫酸镁0.25g，硝酸钠2g，硫酸亚铁0.4g。