[发明专利]用于促进人胚肺成纤维细胞增殖分化的多种生长因子复合物纤维蛋白凝胶释放系统

权利要求书

1.一种用于促进人胚肺成纤维细胞增殖分化的多种生长因子复合物纤维蛋白凝胶释放系统，其特征在于：包括纤维蛋白凝胶释放系统及以之为载体加入其中的四种生长因子，所述四种生长因子为血小板源性生长因子-AB、血管内皮生长因子、转化生长因子-β1及表皮生长因子。

2.根据权利要求1所述的用于促进人胚肺成纤维细胞增殖分化的多种生长因子复合物纤维蛋白凝胶释放系统，其特征在于：所述多种生长因子复合物纤维蛋白凝胶释放系统的构建方法为：先建立纤维蛋白凝胶释放系统，接着再加入四种生长因子复合物。

3.根据权利要求2所述的用于促进人胚肺成纤维细胞增殖分化的多种生长因子复合物纤维蛋白凝胶释放系统，其特征在于：所述纤维蛋白凝胶释放系统为碎片状纤维蛋白二维凝胶模型。

4.根据权利要求2所述的用于促进人胚肺成纤维细胞增殖分化的多种生长因子复合物纤维蛋白凝胶释放系统，其特征在于：所述纤维蛋白凝胶释放系统为岛状纤维蛋白二维凝胶模型。

5.根据权利要求3所述的用于促进人胚肺成纤维细胞增殖分化的多种生长因子复合物纤维蛋白凝胶释放系统，其特征在于：所述碎片状纤维蛋白二维凝胶模型的建立方法为：取纤维蛋白原溶液与凝血酶混合于无菌培养皿正中央，形成直径为8～10mm的半球形液滴，于37℃孵育30分钟，形成吸纳为蛋白凝胶后，用无菌手术刀将其平均分成6小块后置于培养皿中，即得到碎片状纤维蛋白二维凝胶模型。

6.根据权利要求4所述的用于促进人胚肺成纤维细胞增殖分化的多种生长因子复合物纤维蛋白凝胶释放系统，其特征在于：所述岛状纤维蛋白二维凝胶模型的构建方法为，取纤维蛋白原溶液与凝血酶混合与无菌培养皿正中央，形成直径为8～10mm的半球形液滴，于37℃孵育30分钟，即得到岛状纤维蛋白二维凝胶模型。

7.用于促进人胚肺成纤维细胞增殖分化的多种生长因子复合物纤维蛋白凝胶释放系统应用于促进人胚肺成纤维细胞增殖分化的方法，其特征在于：首先对人胚肺成纤维细胞进行培养，其培养方法为：将购买的原代人胚肺成纤维细胞接种于直径10cm的无菌培养皿中，使用含体积分数10%的胎牛血清的RPMI1640培养基，置于37℃ 5%CO₂培养箱中培养，每3天更换一次培养基，当细胞生长增殖至占培养皿面积80～90%时，常规使用0.05%胰蛋白酶进行消化传代，实验选用3-6代成纤维细胞；接着将人胚肺成纤维细胞接种于权利要求1所述的多种生长因子复合物纤维蛋白凝胶释放系统中，进行培养。