[发明专利]一种高纯度藻蓝蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种高纯度藻蓝蛋白的制备方法，其特征在于：所述方法的步骤包括：

(1)将螺旋藻粉与磷酸盐缓冲液按一定比例混合，常温避光搅拌至完全混悬。

(2)将步骤(1)中的螺旋藻液反复冻融7-10次，离心收集上清液。

(3)向上述(2)中的上清液中分两步加入硫酸铵固体，硫酸铵饱和浓度分别为20％-30％和40％-60％，两步分别离心，第一步离心取上清液，第二步离心取沉淀，所得的沉淀用磷酸盐缓冲液透析除盐，得到藻蓝蛋白粗提液。

(4)将上述(3)的藻蓝蛋白粗提液上样于弱阴离子交换柱，进行梯度洗脱，收集A₆₂₀/A₂₈₀>3的流出组分。

(5)将上述(4)收集组分透析除盐后，上样于强阴离子交换柱，进行梯度洗脱，收集A₆₂₀/A₂₈₀>4的流出组分。

(6)将上述(5)收集组分中加入硫酸铵固体，硫酸铵饱和浓度达到40％，4℃静置8小时以上，离心除去上清液得到藻蓝蛋白沉淀，此沉淀用少量磷酸盐缓冲液溶解透析后得到高纯度藻蓝蛋白。

2.根据权利要求1所述的一种高纯度藻蓝蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(1)中螺旋藻粉与磷酸盐缓冲液(0.05mol/L)的比例为1∶10-1∶15(质量/体积)，混合后常温避光搅拌2个小时。

3.根据权利要求1所述的一种高纯度藻蓝蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(4)中弱阴离子交换介质为DEAE Sepharose FF，梯度洗脱条件为含有0.1-0.5mol/L NaCl，pH7.0，0.01mol/L磷酸盐缓冲液。

4.根据权利要求1所述的一种高纯度藻蓝蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(5)中强阴离子交换介质为SOURCE30Q，梯度洗脱条件为含有0-0.3mol/L NaCl，pH7.0，0.01mol/L磷酸盐缓冲液。