[发明专利]一种毛蚶多糖的鉴别方法

权利要求书

1.一种毛蚶多糖的鉴别方法，其特征在于使用凝胶高效液相色谱法，具体步骤如下：

色谱条件及系统适应性：用亲水球形高聚物为填充剂的凝胶色谱柱；以0.05-0.15mol/L的硫酸钠溶液为流动相；示差折光检测器；柱温：30℃-45℃；流速：0.5ml-1 ml /min；理论板数按葡萄糖峰计算应不低于3000；

制备毛蚶多糖：取毛蚶制剂研细，称取含毛蚶提取物约0.5-5g的样品，加10-20倍的石油醚：乙醇=1：0.5-2的溶液，于30℃-50℃水浴保温1-3hr，超声提取15-45min，脱脂棉过滤，取滤渣，挥干；加去离子水10-30ml，用氢氧化钠溶液调pH至6.5～8.5，70℃-90℃水浴0.5-4hr，时时搅拌，过滤，滤液另器保存，滤渣加去离子水5-50ml，继续水浴搅拌0.5-2hr，时时搅拌，过滤，滤液合并，加1-4倍量乙醇沉淀6hr以上，弃上清液，下层液离心，沉淀加去离子水5-50ml ，70℃-90℃水浴2hr，离心，取上清液；加1/4-1/2体积的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，剧烈振摇，离心，取上层液体，重复操作多次，至液面中间蛋白层完全消失，取上层液体，加入2-5倍量乙醇沉淀6hr以上，弃上清液，下层液离心离心，取沉淀，80℃以下减压干燥，制得毛蚶多糖；

制备毛蚶多糖供试品溶液：取毛蚶多糖，加流动相使溶解，制成每1ml含2-25mg的溶液，即得；

测定：取毛蚶多糖供试品溶液10-100μl，注入液相色谱仪，测定；

多糖图毛蚶谱中呈现2个特征峰，以图谱中的S峰为参照，计算2特征峰与S峰的相对保留时间：峰1为0.56±10%、峰2为0.68±10%、峰S 为1。

2.根据权利要求1的一种毛蚶多糖的鉴别方法，其特征在于色谱条件及系统适应性：用亲水球形高聚物为填充剂的凝胶色谱柱；以0.1mol/L的硫酸钠溶液为流动相；示差折光检测器；柱温：40℃；流速：0.5ml /min；理论板数按葡萄糖峰计算应不低于5000。

3.根据权利要求1的一种毛蚶多糖的鉴别方法，其特征在于制备毛蚶多糖为：取毛蚶制剂研细，称取含毛蚶提取物约1-3g的样品，加15倍的石油醚：乙醇=1：1-1.5的溶液，于35℃-45℃水浴保温2-3hr，超声提取20-40min，脱脂棉过滤，取滤渣，挥干；加去离子水15-25ml，用氢氧化钠溶液调pH至7～8，80℃水浴1-3hr，时时搅拌，过滤，滤液另器保存，滤渣加去离子水10-40ml，继续水浴1-2hr，时时搅拌，过滤，滤液合并，加2-3倍量乙醇沉淀6hr以上，弃上清液，下层液离心，沉淀加去离子水15-25ml ，80℃水浴2hr，离心，取上清液；加1/4-1/2体积的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，剧烈振摇，离心，取上层液体，重复操作多次，至液面中间蛋白层完全消失，取上层液体，加入3-4倍量乙醇沉淀6hr以上，弃上清液，下层液离心离心，取沉淀，80℃以下减压干燥，制得毛蚶多糖。

4.根据权利要求1或权利要求3的一种毛蚶多糖的鉴别方法，其特征在于制备毛蚶多糖为：取毛蚶制剂研细，称取含毛蚶提取物约2g的样品，加15倍的石油醚：乙醇=1：1的溶液，于40℃水浴保温3hr，超声提取30min，脱脂棉过滤，取滤渣，挥干；加去离子水20ml，用氢氧化钠溶液调pH至7.5～8，80℃水浴3hr，时时搅拌，过滤，滤液另器保存，滤渣加去离子水20ml，继续水浴2hr，时时搅拌，过滤，滤液合并，加3倍量乙醇沉淀6hr以上，弃上清液，下层液离心，沉淀加去离子水20ml ，80℃水浴2hr，离心，取上清液；加1/4体积的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，剧烈振摇，离心，取上层液体，重复操作多次，至液面中间蛋白层完全消失，取上层液体，加入3倍量乙醇沉淀6hr以上，弃上清液，下层液离心离心，取沉淀，80℃以下减压干燥，制得毛蚶多糖。

5.根据权利要求1的一种毛蚶多糖的鉴别方法，其特征在于制备毛蚶多糖供试品溶液为：取毛蚶多糖，加流动相使溶解，制成每1ml含10mg的溶液，即得。

6.根据权利要求1的一种毛蚶多糖的鉴别方法，其特征在于取毛蚶多糖供试品溶液10-50μl，注入液相色谱仪，测定。

7.根据权利要求1或权利要求6的一种毛蚶多糖的鉴别方法，其特征在于取毛蚶多糖供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定。