[发明专利]一种兼具细胞特异靶向性、还原响应性及三重抗癌治疗功效的介孔硅纳米药物载体的制备方法

权利要求书

1.一种兼具细胞特异靶向性、还原响应性及三重抗癌治疗功效的介孔硅纳米药物载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)利用溶胶凝胶和模板法制备出单分散的介孔硅纳米颗粒，得到介孔硅纳米颗粒悬浊液；

2)向所述介孔硅纳米颗粒悬浮液中加入3-(三乙氧基甲硅烷基)丙基琥珀酸酐，之后，3-(三乙氧基甲硅烷基)丙基琥珀酸酐水解，得到羧基化的介孔硅纳米颗粒；

3)采用胱胺分子功能化所述羧基化介孔硅纳米颗粒，制备出二硫键功能化的介孔硅纳米颗粒；

4)将药物负载到所述二硫键功能化的介孔硅纳米颗粒中；

5)采用细胞色素C分子封堵经过步骤4)处理的二硫键功能化介孔硅纳米颗粒，制备出还原响应性介孔硅/细胞色素C复合系统；

6)采用DNA适体单链分子(AS1411)功能化步骤5)所得的还原响应性介孔硅/细胞色素C复合系统，获得产品。

2.根据权利要求1所述的一种兼具细胞特异靶向性、还原响应性及三重抗癌治疗功效的介孔硅纳米药物载体的制备方法，其特征在于：所述步骤1)的具体过程是：将作为模板剂的十六烷基三甲基溴化铵与氢氧化钠充分溶解至二蒸水中，水浴加热至75℃～85℃，获得pH＝11～13的十六烷基三甲基溴化铵溶液；用匀速加样器逐滴加入正硅酸四乙酯至所述十六烷基三甲基溴化铵溶液中，持续搅拌，直至混合液成为白色悬浊液，即得到介孔硅纳米颗粒悬浊液。

3.根据权利要求1所述的一种兼具细胞特异靶向性、还原响应性及三重抗癌治疗功效的介孔硅纳米药物载体的制备方法，其特征在于：所述步骤2)的具体过程是：将3-(三乙氧基甲硅烷基)丙基琥珀酸酐缓慢滴加至步骤1)所得的悬浊液中，水浴保温，搅拌4～6h后，离心即得到羧基化的介孔硅纳米颗粒粗制品，记为CTAB@MSNs-TPS；而后，通过甲醇/盐酸混和溶液抽取所述粗制品中的十六烷基三甲基溴化铵，得到规则孔道结构的羧基化介孔二氧化硅纳米颗粒，记为MSNs-TPS。

4.根据权利要求1所述的一种兼具细胞特异靶向性、还原响应性及三重抗癌治疗功效的介孔硅纳米药物载体的制备方法，其特征在于：所述步骤3)的具体过程是：

将羧基化介孔硅纳米颗粒(MSNs-TPS)均匀分散在pH＝5.0～6.0的磷酸盐缓冲液(PBS)中，再向磷酸盐缓冲液(PBS)中加入1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳化二亚胺盐酸化物(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，室温搅拌3h以活化介孔硅纳米材料的羧基；之后，加入胱胺盐酸盐，室温下搅拌36～48h后，用双蒸水和无水乙醇洗涤上述溶液的离心产物，除去介孔内残留的溶剂，冷冻干燥后即得到二硫键功能化介孔硅纳米颗粒，记为MSNs-S-S。

5.根据权利要求1所述的一种兼具细胞特异靶向性、还原响应性及三重抗癌治疗功效的介孔硅纳米药物载体的制备方法，其特征在于，所述步骤4)的具体过程是：将异硫氰酸荧光素(FITC)或盐酸阿霉素溶解于pH＝5.5～6.5的磷酸盐缓冲液(PBS)中，再向磷酸盐缓冲液(PBS)中加入二硫键功能化介孔硅纳米颗粒(MSNs-S-S)，搅拌18～24h后，再加入细胞色素C、1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳化二亚胺盐酸化物(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，室温搅拌18～24h，离心得到的产物即为还原响应性介孔硅/细胞色素C复合系统，记为MSNs-CtyC。

6.根据权利要求1所述的一种兼具细胞特异靶向性、还原响应性及三重抗癌治疗功效的介孔硅纳米药物载体的制备方法，其特征在于，所述步骤5)的具体过程是：将所述还原响应性介孔硅/细胞色素C复合系统和4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐共同溶解于交联缓冲液中，室温搅拌6～12h，离心，获取颗粒，洗涤该颗粒以去除残余溶剂，之后将去除残余溶剂的颗粒重悬于交联缓冲液，并加入巯基化的DNA适体，室温下温和搅拌0.5～1.0h，得到适体DNA功能化的还原响应性细胞靶向介孔硅/细胞色素C复合系统，记为MSNs-CytC-Apt。

7.1～6任一项权利要求所获得的产品。