[发明专利]MiR-424-5p在抑制转移性肝癌中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及MiR-424-5p在抑制转移性肝癌中的应用，属于分子生物学技术领域。

背景技术

肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一。肝细胞性肝癌(hepatocelluar carcinoma，HCC)是肝癌最主要的病理类型，占原发性肝癌的80％左右，在我国占到了90％。肝细胞肝癌发病率死亡率居高不下，具高转移性。肿瘤的转移是一个多步骤、多因素的复杂过程，肝癌的高转移性是其高致死率的重要原因。而抵抗失巢凋亡，是肝癌细胞进行转移的首要条件。

大多数细胞的增殖取决于两个信号：第一，细胞需要确定它们被适当地定位在组织内,通过表面受体感知细胞外基质并使之与细胞骨架相连，这一行为激活许多信号级联反应并且影响细胞对其他刺激的反应；第二，细胞需要生长因子和细胞因子促进增殖。对这两个信号的精确调节确保所有器官正常发育。正常情况下，当细胞失去正常细胞基质间相互作用，细胞周期会发生阻滞并且引发caspase介导的细胞程序性死亡，称为失巢凋亡。失巢凋亡使得发生“错位”的细胞被消除，从而防止异位增生。当细胞发生恶性转化时，能够通过其它渠道获得迁徙和增殖特性，并发生对失巢凋亡的抵抗，从而导致转化细胞在异位的恶性增生，即形成转移癌。

失巢凋亡能够作为肝癌转移过程中的一个筛选压力。能够抵抗失巢凋亡的肝癌细胞，其侵袭力、转移力、抵抗放疗、化疗和凋亡诱导治疗的能力都大大增强。因此，肝癌细胞能够通过抵抗失巢凋亡，获得在循环系统存在的能力，并通过逃逸肿瘤治疗，获得机会到达异位，形成转移癌。因此，获得抵抗失巢凋亡能力的肝癌细胞，是一类具有强大侵袭转移力的转移性肝癌细胞。

miRNA是一类内源性的、不参与蛋白质编码的小RNA分子，其长度大约有18-25个核苷酸。miRNA前体，经酶切割为成熟miRNA。后者与相关蛋白一起组成RNA-诱导沉默复合体(RISC)，调控其靶基因的表达。miRNA调控靶基因的方式有两种：与靶基因mRNA的3’UTR结合导致其降解；与靶基因mRNA3’UTR结合抑制其翻译。在植物中比较普遍的沉默机制中，miRNA和靶基因mRNA几乎完全配对时，诱导其降解。然而大多数哺乳动物是通过不完全的配对结合，从而在转录后水平抑制基因翻译。除此之外，miRNA还可通过促进靶mRNA polyA尾的去除，mRNA快速脱腺苷酸化促进了其被3`核酸外切酶水解。人类的microRNA由2％的基因编码，却能调控人体约30％的基因。多种miRNA已被报道在肿瘤发生中参与调节相关基因的表达。非编码小RNA在调控EMT的细胞信号通路中具有重要作用。例如miR-200和miR-205抑制ZEB1和ZEB2，后者调控E-cadherin的表达，由此维持上皮细胞的表型。

鉴于miRNA在癌症发生发展的重要作用，我们在前期建立的肝癌失巢模型中，进行了microRNA差异表达谱的分析，miR-424-5p是在转移性肝癌细胞中下调最明显的microRNA之一。已有研究证明miR-424-5p可以调控众多生物学行为，包括细胞分化增殖，细胞周期。有相关报道证明miR-424-5p在一些癌症中表达异常。这些资料证明miR-424-5p在癌症恶性行为中的重要作用，但是对于miR-424-5p在肝癌中的作用机制还未有报道，对其靶基因的研究也仅限于少数基因。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了miR-424-5p的新用途——在制备抑制转移性肝癌的药物中的应用。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明建立了肝癌失巢模型，并获得了能够抵抗失巢凋亡和具备强侵袭转移力的转移性肝癌细胞。通过进行microRNA差异表达谱的分析，发现miR-424-5p是在转移性肝癌细胞中下调最明显的microRNA之一。进一步地，本发明构建了miR-424-5p的表达载体，转染肝癌细胞，结果表明肝癌细胞转染miR-424-5p后细胞增殖能力减弱。因此，可以认为，miR-424-5p可以抑制肝癌细胞的转移，并降低肝癌细胞对失巢凋亡的抵抗，具有引起肝癌细胞细胞周期阻滞、抑制肝癌细胞增殖、克隆形成能力等作用。因此，miR-424-5p可以用于制备抑制转移性肝癌的药物。

所述miR-424-5p的序列为CAGCAGCAAUUCAUGUUUUGAA，如SEQ ID NO.1所示；其特异性扩增引物序列如下：特异性的上游引物序列为：GGCAGCAGCAATTCATG，如SEQ ID NO.2所示；通用下游引物序列为：CAGTGCGTGTCGTGGAG，如SEQ ID NO.3所示。