[发明专利]带有荧光标签的植物表达载体及其构建方法

权利要求书

1.一种带有荧光标签的植物表达载体，其特征在于该载体为SEQ ID NO.1所示的碱基序列。

2.一种根据权利要求1所述的带有荧光标签的植物表达载体的构建方法，其特征在于该方法的具体步骤为：

a.在www.arabidopsis.org网站上下载UBQ10的启动子序列，根据UBQ10序列设计引物，该引物为：

上游(Hind III) CCCAAAGCTTCTCTTATAAGTTACAAACCCT

下游(Sac I)CCCAAAGCTTCTCTTATAAGTTACAAACCCT；

在上述的上下游引物的两端分别加入Hind III和Sac I酶切位点，长度选取转录起始点至上游1814bp， 然后进行扩增，并将所扩增的目的片段用Taq酶进行加A处理（在所扩增目的片段双链DNA每条链的3’端加上一个突出的碱基A，PMD18-T载体是一种已经线性化的载体，载体每条链的3’端带有一个突出的T，利用AT配对的原理将目的片段与PMD18-T载体进行连接），加A后进行凝胶回收，将所回收得到的目的片段连入PMD18-T载体； 

b.将p1300载体用Hind III、Sac I进行酶切并回收载体片段，然后将步骤a所得UBQ10启动子序列用Hind III、Sac I从T载体上酶切下并回收，并连入p1300载体中；然后以BamHI、Sal I进行酶切，并回收载体片段备用；

   c. 根据GFP序列设计引物，引物序列为：

上游(BamHI) CGGGATCCCGATGGTGAGCAAGGGCGAGGA

下游(Sal I) GCGTCGACGTTTACTTGTACAGCTCGTCC

    上述上下游引物的两端分别加入BamHI和Sal I酶切位点，再进行扩增，将扩增后的GFP片段用BamHI、Sal I从T载体上酶切下来，并和步骤b所得的连有UBQ10启动子的p1300载体相连接，即得到带有荧光标签的植物表达载体。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的步骤a中的扩增参数为：

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4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的步骤c中的扩增参数为： 

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