[发明专利]用蜜蜂LOC726515基因检测蜂王浆产量的方法无效
| 申请号： | 201410190650.7 | 申请日： | 2014-05-07 |
| 公开（公告）号： | CN103937903A | 公开（公告）日： | 2014-07-23 |
| 发明（设计）人： | 苏松坤;潘娇;陈盛禄 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 邱启旺 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 蜜蜂 loc726515 基因 检测 蜂王浆 产量 方法 | ||
1.一种用蜜蜂LOC726515基因检测蜂王浆产量的方法，其特征在于，鉴别方法如下：
（1）蜜蜂取样：从被考察蜂群中，每群分别采集30只哺育蜂；所述哺育蜂指蜂群中哺育幼虫的工蜂，即6－12日龄的工蜂；
（2） 蜜蜂头部RNA提取及cDNA合成：提取所采集哺育蜂头部的RNA，反转录获得cDNA；
（3）引物设计：设计合成引物Primer-F和 Primer-R，Primer-F的序列如SEQ ID NO.3所示，Primer-R 的序列如SEQ ID NO.4所示；
（4）荧光定量PCR检测：以稀释后的蜜蜂头部cDNA为模板， 以Primer-F和 Primer-R为引物，进行荧光定量PCR；选用蜜蜂头部的GAPDH为内参基因，采用2-△△ct 方法计算蜜蜂LOC726515基因的表达量；在每个蜂群样本的每次qRT-PCR反应中均重复多次，取多次重复的平均值为蜜蜂LOC726515基因的最终表达量，最终表达量越高，则該蜂群的蜂王浆产量性能越好；所述2-△△ct为蜜蜂LOC726515基因的相对表达量，其中△△Ct = (Cttarget-CtGAPDH) treatment - (Cttarget-CtGAPDH) control。
2.根据权利要求1所述的一种用蜜蜂LOC726515基因检测蜂王浆产量的方法，其特征在于，所述荧光定量PCR的反应体系为：总体积为20ul，内含SYBR GreenⅠ 10ul，Rox 0.4ul，Primer-F 0.4ul，Primer-R 0.4ul，cDNA 2ul，DEPC水补足到20ul。
3.根据权利要求1所述的一种用蜜蜂LOC726515基因检测蜂王浆产量的方法，其特征在于，所述荧光定量PCR的反应条件如下：预变性 95℃，30s，PCR反应40 cycles，95℃，5s，61℃, 31s，溶解曲线 55℃，20s。
4.根据权利要求1所述的一种用蜜蜂LOC726515基因检测蜂王浆产量的方法，其特征在于，所述蜂头部RNA提取及cDNA合成，采用TRizol方法提取RNA，采用反转录试剂盒完成cDNA的合成。
5.根据权利要求1所述的一种用蜜蜂LOC726515基因检测蜂王浆产量的方法，其特征在于，所述稀释后的蜜蜂头部cDNA，即用DEPC水将蜜蜂头部cDNA稀释 6倍体积。
6.根据权利要求1所述的一种用蜜蜂LOC726515基因检测蜂王浆产量的方法，其特征在于，所述在每个蜂群样本的每次qRT-PCR反应中均重复多次，其重复次数为3次。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于浙江大学，未经浙江大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201410190650.7/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
