[发明专利]一种抗干扰性强的同型半胱氨酸检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种同型半胱氨酸检测试剂盒，属临床体外检测试剂技术领域。 

背景技术

同型半胱氨酸(又称高半胱氨酸Homocysteine ，HCY) 是含硫氨基酸，在细胞内由蛋氨酸脱甲基生成。McCully 于1969 年最先将重度同型半胱氨酸血症(tHCY浓度100 - 450μmol/ L) 与动脉粥样硬化疾病相联系，重度同型半胱氨酸血症是由于参与同型半胱氨酸代谢的转甲基或转硫作用的酶缺陷所致，常见的有胱硫酶合成酶及亚甲基四氢叶酸还原酶缺陷。重度同型半胱氨酸血症病人有早发性动脉粥样硬化，动静脉栓塞及智力障碍。近年来，人们开始注意同型半胱氨酸与心血管疾病的联系。同型半胱氨酸可使小动脉血管易于栓塞及促进血管平滑肌细胞增殖参与粥样硬化形成。同型半胱氨酸活化形式(Homocystein thiolactone) 可促使血小板聚集，并可与载脂蛋白B 形成致密的复合物易于被血管壁巨噬细胞吞噬，引起血管壁脂肪堆积。同型半胱氨酸能增强其它心血管疾病危险因素如胆固醇、高血压及吸烟对心血管的损害。通过上述机制，同型半胱氨酸促进动脉粥样硬化及血栓形成，使心血管疾病发病率及死亡率增加，血中同型半胱氨酸浓度升高(tHCY ≥12μmol/ L) 是冠心病、中风、外周血管粥样硬化及动静脉栓塞的危险因子，血中同型半胱氨酸升高使心血管疾病发病率及死亡率增加。 

有报告高同型半胱氨酸血症是周围强直性脊柱炎（As ）疾病如间歇性跛行及深静脉血栓的一个独立危险因素。近来的研究表明，高同型半胱氨酸血症除与血管疾病有关外，还与神经管畸形、先兆子痫、帕金森氏病、老年痴呆、胎儿生长迟缓、慢性肾功能衰竭等多种疾病有关。因此测定血中tHCY浓度在临床上意义十分重要。 

对于同型半胱氨酸检测的方法主要有：同位素标记检测、HPLC液相色谱检测、荧光偏振法检测、化学发光检测和酶法检测。由于同位素标记检测和HPLC液相色谱检测方法，灵敏度较差，而且同位素标记检测方法有放射污染，因此这两种方法已经逐渐被淘汰。荧光偏振法和化学发光检测方法灵敏度、准确度都比较好，但是配套仪器和试剂盒成本较高，影响了市场推广。现在医院对于同型半胱氨酸检测的试剂盒多采用酶法检测，该方法操作简单，应用医院常见的全自动生化分析仪进行检测，成本较低。 

酶法检测的主要原理为基于小分子捕获技术（SMT）的S-腺苷同型半胱氨酸水解酶。 Hcy被转化为游离型后，通过与共价底物反应，循环放大，同时产生腺苷。腺苷在腺苷脱氨酶作用下，立即水解成氨和次黄嘌呤，氨在谷氨酸脱氢酶的作用下，使NADH转化为NAD，样本中的Hcy浓度与NADH转化速率成正比。 

具体的反应流程为： 

利用酶法对同型半胱氨酸进行检测的方法操作简单，而且检测同型半胱氨酸对临床心血管疾病诊断有着很好指导意义，因此最近几年得到了很好的推广。但是该检测方法，容易受到血清中丙酮酸等杂质物质的干扰，造成检测的结果不准确，在与化学发光检测试剂盒比对时，结果有偏差，不利于临床检测应用。

发明内容

针对于上述常规同型半胱氨酸检测试剂盒（酶法）存在的技术问题，本发明提供了一种抗干扰性强的同型半胱氨酸检测试剂盒（酶法），本试剂盒能够与化学发光检测的结果具有高度的一致性（相关系数r≥0.990），检测临床样本准确度、灵敏度比常规的试剂要好，有利于提高临床检测同型半胱氨酸的准确性。 

本发明是通过以下措施实现的： 

一种抗干扰性强的同型半胱氨酸检测试剂盒（酶法），包括组分1（R1）和组分2（R2）；各组分原料含量如下：

组分1（R1）：                                        

S-腺苷甲硫氨酸（SAM）                          0.1-1mM

NADH                                                   0.3-1mM

三（2羧乙基）膦氯化氢（TCEP）               0.5-5 mM

α－酮戊二酸                                           1-10mM

抗坏血酸氧化酶                                       1-5 KU/L

组分2（R2）：

Hcy甲基转移酶（HMTase）                       1-10KU/L