[发明专利]一种防治褐飞虱的混合配方制剂

说明书

技术领域

本发明涉及生物防治技术领域，特别是涉及脐孢木霉菌0248代谢产物和吡虫啉混合配方制剂的应用。 

背景技术

褐飞虱（Nilaparvata lugens St?l）是水稻的重要害虫之一，主要以刺吸韧皮部汁液和传播水稻病毒的方式为害水稻植株。虫害大发生时会出现大面积的稻株枯死倒伏，造成粮食减产，甚至绝收。生产上，化学农药是防治褐飞虱的主要手段。但是，由于化学杀虫剂的大量频繁使用，褐飞虱对许多化学杀虫剂产生了抗药性，导致防治效果明显下降。因此，研究和应用减少水稻褐飞虱发生和为害的新手段已迫在眉睫。 

昆虫与微生物的共生是一种普遍存在的现象，在进化过程中两者形成了密不可分的关系。昆虫为共生菌提供了稳定的小生境和营养，而昆虫依靠共生菌合成食物中缺乏的某些重要营养成分，同时共生菌对昆虫的代谢解毒也有一定作用，如为昆虫合成重要的营养成分，参与氮素循环，降解昆虫体内外源物质等。缺失共生菌会直接造成昆虫生长繁殖受阻、死亡率上升等。研究表明，褐飞虱体内腹部脂肪体中也存在多种类酵母共生菌，类酵母菌属子囊菌亚门(Ascomycotina)，核菌纲(Pyrenomycetes)，Candida 属。褐飞虱类酵母共生菌可为寄主合成提供必需氨基酸、固醇类物质以及蛋白质等多种营养成分，弥补了褐飞虱取食营养结构的不平衡，保证了褐飞虱的正常生长和繁殖；酵母类共生菌缺失会导致褐飞虱生长受阻、发育停滞、甚至死亡。既然褐飞虱与类酵母共生菌在生长繁殖中关系如此紧密，通过“抑制类酵母共生菌从而间接防治褐飞虱”的手段来控制褐飞虱发生以及减少其为害必将是今后防治褐飞虱的一种重要手段。因为抑制褐飞虱体内的共生菌不但可直接或间接的达到控制褐飞虱的目的，而且还可有效提高目前杀虫剂的防治效果、延缓褐飞虱抗药性的发展。 

发明内容

本发明将脐孢木霉菌（Trichoderma brevicompactum）0248代谢产物和常规杀虫剂吡虫啉按照一定的比例混合制备成新的配方，并研究了该配方对褐飞虱体内类酵母共生菌的抑制作用和对褐飞虱的杀虫效果。该发明为水稻褐飞虱的有效防治提供了新的方法。 

本发明的目的是针对褐飞虱对常规化学杀虫剂产生抗药性，导致化学防治效果明显下降的不足，提供一种利用脐孢木霉菌0248代谢产物抑制褐飞虱体内类酵母共生菌生长，进而引起褐飞虱死亡的新思路；本发明的另一目的是提供了一种防治褐飞虱的新方法和新药剂。 

本发明脐孢木霉菌（Trichoderma brevicompactum），定名为脐孢木霉菌0248。该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期2012年12月12日，保藏登记号CGMCC No. 6985。 

本发明所述的脐孢木霉菌0248，经发酵可获得对褐飞虱类酵母共生菌具有抑制作用的代谢产物。 

本发明目的通过以下技术方案来实现： 

脐孢木霉菌0248代谢产物和吡虫啉混合配方制剂在防治褐飞虱中的应用，按以下步骤进行：

（1）菌种的活化培养：将分离保存的脐孢木霉菌0248菌种移至马铃薯葡萄糖培养基（PDA）平板上，在28℃±1℃条件下，培养至培养皿长满绿色孢子，加入10ml无菌水，用涂布棒轻轻刮，洗下的孢子液用无菌滤纸过滤，得到孢子悬液，并用血细胞技术板计数使孢子悬液浓度为1.0×10⁶个/ml；

（2）发酵培养：发酵培养液为每1000ml中含有葡萄糖8g，牛肉膏10g，NaCl 2g，每300ml三角瓶装发酵培养液60ml；配制后立即121℃灭菌20min，待冷却至40℃在无菌条件下接种浓度为1.0×10⁶个/ml的孢子悬液1ml，在 28℃±2℃条件下，培养3天； 

（3）发酵代谢产物收集：发酵完毕，离心，弃菌丝体，收集发酵液，此发酵液即为脐孢木霉菌0248代谢产物；

（4）药液配制：将步骤（4）获得的脐孢木霉菌0248代谢产物和常规杀虫剂配比，用于褐飞虱的防治。

本发明的有益效果：本发明提供了一种利用脐孢木霉菌0248代谢产物和吡虫啉混合配方防治褐飞虱的新方法。 

具体实施方式

实施例1：（脐孢木霉菌0248代谢产物的制备） 

按以下步骤进行：