[发明专利]一种PGI和PGII联合检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种PGI和PGII联合检测试剂盒，尤其是通过酶联免疫一步法联合检测PGI和PGII的试剂盒，属于体外诊断试剂领域。

背景技术

胃癌是全球高危死亡率的第二大疾病，严重威胁着人类健康。胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，死亡率局各种恶性肿瘤前列，全球每年934,000新发胃癌病例，42％(近40万)的新发病例数在我国，胃癌在我国的患病率和死亡率均是世界水平的2倍多。其早期诊断、早期治疗是提高患者生存质量、降低死亡率的唯一途径，改善胃癌患者预后的关键是作好二级预防，血清胃蛋白酶原(PG)检测可以作为胃癌筛查“二步法”中的初筛方法。联合测定ＰＧＩ和ＰＧⅡ的水平及其比值可起到胃黏膜“血清学活检”的作用，有利于胃癌的预防干预、早期诊断以及术后复发预测。近年来，血清PG含量的变化与胃癌及其他胃部疾病的关系及其作为初筛手段在胃癌筛查中的应用已引起越来越多研究者的关注。

PG是一种门冬氨酸蛋白酶前体，是分子质量为42KDa的单链多肽。人类PG依其电泳迁移率可以分为7个组分，1-5组分的免疫原性相同，成为PGI，主要由胃腺的主细胞和黏液颈细胞分泌；组分6-7被称为PGII，除由胃体和胃底黏膜的泌酸腺的主细胞分泌外，泌酸腺的黏液颈细胞、贲门腺和胃窦的幽门腺的黏液细胞以及十二指肠上段的Brunner腺也能产生PGII。由于胃几乎是PG的唯一来源，并且在分泌阶段的分泌量会发生变化，因此，血清PGI和PGII不仅反映了胃黏膜腺体和细胞的数量，也间接反映了胃黏膜不同部位的分泌功能。

通常情况下约有1％的PG通过胃黏膜进入血液循环，进入血液循环的PG在血液中非常稳定。血清PG水平是反映胃黏膜形态和功能的良好指标。大部分酶原进入胃腔，经酸解成具有活性的胃蛋白酶发挥其消化蛋白质的作用。但也有少量透过胃黏膜毛细血管进入血液，可从血清中检测。当胃粘膜发生病变时，血清中PG的含量也随之发生改变。血清PG含量的变化与胃癌及其他胃部疾病的关系及其作为初筛手段在胃癌筛查中的应用已引起越来越多研究者的关注。研究发现，在常规体检中大约有15％左右的人的血清PG水平异常，而进一步进行胃镜检查，其中90％以上的患者有不同程度的浅表性胃炎、糜烂性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、萎缩性胃炎、胃癌等胃部疾病。近年来，血清PG含量的变化与胃癌及其他胃部疾病的关系及其作为初筛手段在胃癌筛查中的应用已引起越来越多研究者的关注。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种PGI和PGII联合检测试剂盒。所述试剂盒利用抗原抗体特异性反应来检测血清中PGI和PGII的含量，主要由以下部分组成：包被有PGI抗体的微孔板、包被有PGII抗体的微孔板、酶标抗体、校准品、底物液、终止液、浓缩洗涤液。

所述试剂盒还包括质控品、封板膜和说明书。

所述PGI抗体和PGII抗体是利用PGI和PGII抗原蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体得到，或直接购买商业化PGI抗体和PGII抗体产品。所述PGI和PGII抗原蛋白是通过基因工程克隆表达得到的蛋白。

所述分别包被有PGI抗体、PGII抗体的微孔板的制备：

(1)包被：用包被机或移液器将包被液按100μl/孔加入微孔板，封板膜封闭微孔板，放置于4℃冰箱过夜，用洗板机、稀释至0.025M的浓缩洗涤液洗板5次；所述包被液包括PGI包被液和PGII包被液，PGI包被液是将PGI抗体用包被缓冲液配制成0.5μg/ml浓度，搅拌混匀；PGII包被液是将PGII抗体用包被缓冲液配制成0.5μg/ml浓度，搅拌混匀；所述微孔板是96孔板；

(2)封闭：用包被机或移液器将封闭液按300μl/孔加入微孔板；封板膜封闭微孔板，放置于37℃封闭1小时；用洗板机、稀释至0.025M的浓缩洗涤液洗板5次；

(3)真空包装：将经上述处理后的微孔板放置于37℃烘箱干燥0.5小时；立即用真空封装机进行真空包装。

所述酶标抗体为PGI和PGII抗体标记的辣根过氧化物酶，使用酶标抗体效价为100IU/ml，酶标抗体稀释液是含有0.5％(m/v)酪蛋白、1％(m/v)蔗糖、0.01％(m/v)叠氮钠的0.1M的磷酸盐缓冲液，pH7.4。

所述校准品为用校准品稀释液配制的不同浓度PGI和PGII抗原蛋白溶液，校准品浓度范围：PGI为0-180μg/L，PGII为0-50μg/L；所述校准品稀释液是含有1μg/ml牛乳糖、3％(m/v)甘露醇、1％(m/v)蔗糖、1％麦芽糖(m/v)、1％山梨醇(m/v)、0.01％(m/v)叠氮钠的0.01M的磷酸盐缓冲液，pH7.4。