[发明专利]一种miR-27a的应用及其诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和医学技术领域，特别涉及一种miR-27a对结肠癌发生或转移诊断的应用。

背景技术

结肠癌是全球范围内最常见的恶性肿瘤之一，结肠癌发生发展的原因尚未完全清楚。结肠癌的淋巴转移和其他脏器远端转移是结肠癌病人死亡的主要原因，结肠癌远端转移的患者预后极差，因此，对结肠癌的发生和转移的研究一直是基础和临床研究的热点。结肠癌的常规治疗手段主要是手术治疗、放化疗。近年来迅速发展的免疫治疗和基因治疗显示了巨大的应用潜力。近年来研究表明表观遗传的改变和癌信号分子的激活是恶性病变发生和进展的主要原因。表观修饰尤其是miRNAs的异常表达与肿瘤的形成、转移相关，并在肿瘤治疗中起关键作用。microRNAs(miRNAs)是一类内源性小分子非编码RNA，结构高度保守，具有表达时序性和组织特异性，通过与靶基因3’非编码区互补序列特异性结合，导致翻译抑制或mRNA降解，从而调节基因的表达。基于miRNA的以上特点，以及随着大规模、高通量miRNA检测技术的推广应用，发现新的miRNA不仅为肿瘤的诊断和预后提供了颇具价值的标准，同时也为寻找新的肿瘤生物治疗靶点奠定基础。

miR-27a位于19号染色体，其表达水平和生物功能随肿瘤类型而异，一些研究报道miR-27a是一种癌基因，例如，在乳腺癌、结肠癌细胞系，肝细胞腺癌细胞中表达增高，而且miR-27a的高表达与乳腺癌的进展和不良预后密切相关。另外一些研究也发现miR-27a通过促进转录因子特异蛋白(Sp)、血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体1(VEGFR1)的表达来发挥其作为癌基因的功能。另一方面miR-27a也扮演着抑癌基因的角色，例如，miR-27a在食管癌、口腔鳞癌和非小细胞肺癌中表达降低。在非小细胞肺癌中，miR-27a靶作用于MET和EGFR的3’UTR导致MET和EGFR的表达降低。

我们的研究发现，miR-27a在结肠癌组织中表达显著降低(41例结肠癌标本中33例miR-27a表达降低)，另外miR-27a的低表达和结肠癌的远处转移(二者正相关)以及临床分期(3-4期的表达低于1-2期)密切相关。miR-27a通过靶作用于smad2、SGPP1抑制肿瘤的生长和转移。我们对miR-27a在结肠癌组织中的表达水平以及其生物功能的研究尚属首次，该研究对结肠癌的发生和转移以及治疗具有重大的意义。

发明内容

针对现有技术不足，本发明的目的是提供一种miR-27a的应用及其诊断试剂盒。

为实现上述目的，本发明提供了一种miR-27a在制备结肠癌发生或转移诊断试剂盒中的应用。

本发明还提供了一种miR-27a在制备抑制结肠癌发生或转移药物中的应用。

本发明还提供了一种结肠癌发生或转移诊断试剂盒，试剂盒含有miR-27a的实时荧光定量PCR引物，所述引物分别为：

上游引物序列为：5’-TTCGGTTCACAGTGGCTAAG-3’，如SEQ ID NO：1所示；

通用下游引物序列为：5’-CAGTGCAGGGTCCGAGGT-3’，如SEQ ID NO：2所示。

该试剂盒还包括PCR反应常用的酶和试剂。作为优选，试剂盒包括：组织总RNA提取试剂、RNA加polyA试剂、逆转录试剂、定量PCR试剂。

其中，逆转录试剂中包括miR-27a的特异逆转录引物，其序列为：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTT GCGGAA，如SEQ ID NO：3所示；

内参snord47的逆转录引物，其序列为：GTGCAGGGTCCGAG GTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTAACCTC，如SEQ ID NO：4所示；

定量PCR试剂中包括miR-27a的特异引物：

上游引物：TTCGGTTCACAGTGGCTAAG，如SEQ ID NO：1所示；

内参snord47的特异引物：

上游引物：CGCCAATGATGTAATGATTCTG，如SEQ ID NO：5所示；

通用下游引物:CAGTGCAGGGTCCGAGGT，如SEQ ID NO：2；

通用Taqman探针:56-FAM/CAGAGCCAC/ZEN/CTGGGCAAT TT/3IABkFQ。