[发明专利]一种结合串联重复序列(TTTACAC)5的Dof蛋白质

说明书

技术领域

本发明涉及一种结合串联重复序列(TTTACAC)₅的Dof蛋白质,尤其涉及一种可以结合植物串联重复序列(TTTACAC)₅的Dof蛋白因子及其编码基因，属于生物技术领域。

背景技术

转录因子也称为反式作用因子，它通过影响或控制特定基因的表达而参与许多重要的生物过程，如：信号转导、形态发生、环境应激反应等等。众所周知，转录因子可以结合启动子区的顺势调控元件进而调节基因的转录速率，另外，转录因子也可以介导蛋白质-蛋白质相互作用（Nat Rev Genet 2004, 5:276-287）。目前，人们已鉴定了许多转录因子基因家族，这其中有许多是植物特异性的，如WRKY家族、R2R3-MYB家族、bZIP家族、MADS家族等等。Dof( DNA binding with one finger)蛋白也是一类植物特有的转录因子，它通常含有两个结构域：一个是N-末端的DNA结合结构域；另一个是C-末端的调控结构域。其中，N-末端的结合域含有4个位置保守的Cys，它可以形成C₂-C₂锌指结构。这些结构域参与了不同调控蛋白或信号的结合，因而呈现多种生物功能，如：植物抗性（Plant J 1996, 10:955-966）、种子储存蛋白合成（Proc Natl Acad Sci U S A 1997, 94:7685-7690）、植物生长素和赤霉素响应（Plant Cell 1999, 11:323-334; Biochim Biophys Acta 2001, 1520:54-62）、碳水化合物代谢（Plant Cell 1998, 10:75-89）、种子萌发（Plant Cell 2002, 14:1253-1263）、光控植物开花（Trends Plant Sci 2006, 11:550-558）、细胞循环调节（Plant J 2008, 56:779-792）等等。Dof蛋白还可以通过与其它转录因子结合参与生物活性，如：Dof转录因子（OBP1）与bZIP转录因子（OBF4、OBF5）作用可以促进后者与靶DNA的结合（Plant Cell 1995, 7:2241-2252）；小麦WPBF与TaQM作用可以促进参与种子发育的阿尔法麸朊蛋白的转录（Plant Mol Biol 2007, 63:73–84）。

许多试验表明Dof蛋白与AAAG基序特异性结合（Trends Plant Sci2002,7:555-560）。Dof蛋白通过结合启动子上的AAAG 基序激活转录, 而启动子中该序列的突变往往导致转录的消失（Plant Cell 1998,10:75-89; Plant J 2001,28:455-464）。番茄Dof基因通过结合KST1启动子区的TAAAG基序诱导基因在保卫细胞中的表达（Plant J 2001,28:455–464）。

然而，至今还没有Dof转录因子结合串联重复序列的报道。本发明鉴定了一可以结合串联重复序列(TTTACAC)₅的Dof蛋白质，而前期实验(ZL201210087731.5)表明该串联重复序列具有提高植物基因表达活性的特征，因而，该Dof蛋白质具有潜在的调控基因表达活性的功能。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种结合串联重复序列(TTTACAC)₅的Dof蛋白质及其编码基因。

本发明提供的Dof蛋白质是一种转录因子，来源于拟南芥（Arabidopsis thaliana, Columbia ecotype），具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

本发明提供的Dof蛋白质，其编码基因为如下（1）或（2）所示的核苷酸序列：

（1）       具有SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；

（2）       与（1）限定的DNA序列至少具有不低于70%同源性且编码植物转录因子相关的核苷酸序列。

本发明提供的可以结合串联重复序列(TTTACAC)₅的Dof蛋白质是由酵母单杂交实验获得，并且其结合方式已被EMSA（电泳迁移率实验）实验证实。

本发明还提供一种含有Dof蛋白编码序列的重组载体pUC-Dof。

本发明还提供一种含有Dof蛋白编码序列的重组表达载体pET-Dof。

本发明还提供一种重组菌，由重组载体pUC-Dof转化所得。

本发明还提供一种重组菌，由重组载体pET-Dof转化所得。