[发明专利]一种增强型结核亚单位疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及一种增强型结核亚单位疫苗，具体涉及一种以Ag85b蛋白和ESAT6-CFP10融合蛋白为抗原成份，以BCG-CpG、铝和Poly IC为复合佐剂的新型亚单位疫苗。 

背景技术

结核病是由结核杆菌感染引起的慢性传染病。结核菌可能侵入人体全身各种器官，但主要侵犯肺脏，称为肺结核病。结核病又称为痨病和“白色瘟疫”，是一种古老的传染病，自有人类以来就有结核病。 

我国是世界上22个结核病高负担国家之一，三分之一左右的人口已感染了结核杆菌，受感染人数超过4亿。我国现有肺结核病人约500万，主要集中在25岁及以上人群；其中涂阳肺结核病人150万；每年约有13万人死于结核病，死亡平均年龄为55.2岁。据研究，受结核菌感染的人群中，10％的人会发展为结核病。如果不采取有效的控制措施，在未来的10年，我国可能有近5000万的感染者发生结核病。 

迄今为止，卡介苗(BCG)仍是世界上接种最广泛的一种疫苗，于1921年首先获得批准使用，主要用于结核病高发的地区，自从1974年世界卫生组织将它列入免疫接种计划以来，大约有40亿剂的卡介苗得到接种。BCG是减毒活疫苗，可引起淋巴结肿大和化脓等异常反应。在接种BCG的过程中，除了会干扰纯蛋白衍生物(purified protein derivatives，PPD)诊断结核分枝杆菌感染的价值，最主要的禁忌之一就是当接种者有免疫缺陷，特别是细胞免疫缺陷时，不能进行疫苗接种。BCG可以在接种者体内存活几十年。曾有这样的病例报道：病人在童年时接种过BCG，后来得了艾滋病，于是机体表现出因疫苗而导致的结核病。而艾滋病人由于严重的免疫缺陷，也极易感染结核病，所以如果应用于免疫功能有缺陷的患者(如HIV感染者)，可能会使BCG在患者体内播散而导致患者死亡。因而迫切寻找更具安全性的结核疫苗。 

重组结核杆菌亚单位疫苗，特别是大肠杆菌中表达的亚单位疫苗，具有保护性抗原表位多、表达效率高、发酵工艺成熟、生成成本低、易于大规模生产及广泛使用和再次使用的特点。并且亚单位疫苗具有较高的安全性、易于被人们接受。目前，用于预防性疫苗的候选蛋白主要是结核菌分泌蛋白和细胞壁蛋白成分，例如遭际分泌抗原性蛋白ESAT-6，培养滤液蛋白CFP-10，主要分泌蛋白Ag85，Mtb8.4，Mtb32，热休克蛋白HSP65，HSP70等。 

对亚单位疫苗，高度纯化的重组蛋白需要佐剂提高其免疫原性。目前国内使用的唯 一商业化佐剂是铝佐剂，可诱导强烈的体液免疫，但对细胞免疫作用较弱。考虑抗结核的免疫机制由细胞免疫起主导作用，传统的铝佐剂已不能满足需求。因此，在新型结核亚单位疫苗的研究中，多种新型复合佐剂应运而生，如AS01、AS02、IC31、CAF01和GLA-SE等。通过多种佐剂的联合使用，发挥不同佐剂的功效，提高疫苗的免疫应答，尤其是细胞免疫应答，从而获得更高的免疫保护效果。 

聚肌胞(Poly I：C)是抗肿瘤和疫苗研究中另一种常见的佐剂，它是一种人工合成的dsRNA，作为病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns，PAMP)，特异性识别TLR3受体和MDA-5受体，激活机体固有免疫，诱导产生IL-12和I型干扰素，在国内临床上作为免疫调节剂用于多种病毒感染后的治疗。多项研究也表明，Poly IC及其类似物的佐剂效应非常明显，可提高蛋白类疫苗的体液免疫和细胞免疫。如临床期的IC31佐剂的成分之一即为寡脱氧核苷酸Oligo-(dI：dC)13；也有研究者将Poly I：C加入到临床期的另一个佐剂CAF01，构成新佐剂CAF05，在小鼠模型上具有抗肿瘤作用。国内学者将Poly I：C与聚左旋赖氨酸和羧甲基纤维素复合成新佐剂PolyICLC，与CpG-ODN和DDA(dimethyl dioctyl ammonium bromide，双八烷基二甲基溴化铵)联合使用可增强疫苗抗原特异性的Th1类细胞免疫和体液免疫应答。 

发明名称为一种含联合佐剂的结核亚单位疫苗，公开号为103386128A的发明专利申请，是发明人前期的研究成果，其该疫苗以Ag85b蛋白、ESAT6-CFP10融合蛋白为抗原成份，以铝和PolyIC为复合佐剂，具有能达到较显著的增强免疫的效果，可减轻Mtb感染豚鼠各脏器的病变程度，并有效抑制或杀死豚鼠体内潜伏感染的结核分枝杆菌。尽管如此，该结核亚单位疫苗的免疫效果仍需进一步加强，尤其是在减轻Mtb感染豚鼠各脏器的病变程度，抑制或杀死豚鼠体内潜伏感染的结核分枝杆菌等方面需要加强。 

发明内容