[发明专利]一种利用黄原胶∕壳聚糖∕黄原胶制备双歧杆菌微胶囊的方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于益生菌制品制备技术领域，具体涉及一种利用黄原胶∕壳聚糖∕黄原胶制备双歧杆菌微胶囊的方法及应用。

背景技术

双歧杆菌(Bifidobacteria)是由法国Tisser博士从母乳喂养婴儿的粪便中分离出的一种厌氧菌。经研究发现，双歧杆菌是人体肠道中的一种重要的益生菌，其在肠道中定殖的数量往往与人的健康状况存在着关系。双歧杆菌作为一种典型的益生菌，可通过改善肠道微生物菌群的平衡而发挥保健功能，例如具有双向调理胃肠的功能，抗癌作用，免疫调节功能等。但其对氧极为敏感，对低pH值的抵抗力差，活性保持较为困难。

微胶囊技术具有防止外界环境因素破坏芯材、有效地控制芯材的释放、掩盖芯材的异味、改变芯材的物理和化学性质，使其便于贮藏和运输等作用。可利用微胶囊及技术对益生菌进行双层包埋，以便对益生菌起到更强的保护作用。

目前，利用微胶囊包埋技术保护双歧杆菌的报道很多，大多数都是利用海藻酸盐等材料作为包埋壁材对菌体进行单层或双层包埋。例如，CN1969889A中公开了一种益生菌的微胶囊，该微胶囊是以海藻酸钠和氯化钙为壁材进行单层包埋，然后用壳聚糖在海藻酸钙上进行二次包被；CN10275589A中公开的双歧杆菌包埋方法中提到，先利用果胶对菌体进行单层包埋，再利用海藻酸钠进行双层包埋；CN1884513A中也公开一种双层双歧杆菌微胶囊的制备方法，该微胶囊用变性淀粉、阿拉伯胶、聚乙二醇、海藻酸钠、壳聚糖、氯化钙构成的壁材进行双层包埋；文献“双歧杆菌微胶囊的制备和稳定性研究”公开了一种双层双歧杆菌微胶囊的制备方法，它先以明胶、黄原胶、果胶等复合胶类物质包裹双歧杆菌菌体形成耐酸的保护层，再以海藻酸钠和壳聚糖交联形成耐酸性能更好的双层微胶囊。

除以上提到的包埋材料之外，还可以利用壳聚糖与黄原胶的聚电解质络合作用形成的共混凝胶先对双歧杆菌进行包埋，再在黄原胶中进行二次成膜，得到双层包埋的双歧杆菌微胶囊。此法得到的益生菌微胶囊可应用与果粒橙等液态饮料中，开发出新型的液态食品。壳聚糖和和黄原胶都是天然的生物大分子，生物相容性好，无毒副作用。壳聚糖溶于酸性水溶液中带正电荷，可与带负电荷的阴离子多糖黄原胶通过聚电解质络合作用形成共凝胶，从而作为包埋壁材使用。目前还没有利用黄原胶∕壳聚糖∕黄原胶双歧杆菌微胶囊的制备和应用的发明专利，为此，提供一种黄原胶∕壳聚糖∕黄原胶制备双歧杆菌微胶囊及应用的方法是很有必要的。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术中存在的缺点，提供一种利用黄原胶∕壳聚糖∕黄原胶制备双歧杆菌微胶囊的方法及应用，具有能够提高菌体的包埋产率以及包埋活菌数，将制备出的双歧杆菌微胶囊加入果粒橙等饮料中，可获得新型液态食品的优点。

为实现上述目的，一种利用黄原胶∕壳聚糖∕黄原胶制备双歧杆菌微胶囊的方法，包括以下步骤：

1)将双歧杆菌冻干菌粉接种于MRS肉汤中，在37℃培养条件下MRS活化三次，前两次以3～5％的接种量转接，并在37℃的条件下培养22～24h，第三次按照2～3％的接种量转接，并在37℃的条件下培养18h，后进行离心处理并收集菌体，弃去上清液得菌泥，将菌泥与浓度为0.85～0.9％的无菌生理盐水混合配制成1.2～1.3×10⁹CFU/mL的菌悬液备用；

2)取浓度为0.5～1.1％和0.1％的黄原胶溶液，灭菌和离心除气处理后备用；

3)取浓度为0.4～1.3％壳聚糖溶液，调节pH至5～5.9备用；

4)配制除氧剂溶液，除氧剂为异抗坏血酸钠或半胱氨酸盐酸盐，过滤除菌以备使用；

5)将步骤1)制备的菌悬液和步骤2)制备的浓度为0.5～1.1％的黄原胶溶液按照1:(3～10)的质量比例混合后加入步骤4)制得的除氧剂溶液，充分混匀后得到双歧杆菌菌胶液，除氧剂的添加量按照菌胶液总量的0.03～0.07％加入，将双歧杆菌菌胶液加入磁力搅拌器上的步骤3)制备的壳聚糖溶液中搅拌，菌胶液与壳聚糖比例为1:(3～6)，加入后搅拌，获得微胶囊；

6)待微胶囊完全交联后过滤，将过滤后的微胶囊与步骤2)制备的0.1％的黄原胶溶液以1g:(20～40mL)混合搅拌，后将微胶囊过滤，并洗涤，最终得到双层的双歧杆菌微胶囊，微胶囊的活菌数为3.0～4.5×10⁹CFU/g。

所述的步骤1)中离心时的转速为7000～10000r/min，离心时间为10～15min。