[发明专利]基于丝瓜转录组序列开发的EST-SSR核心引物组及应用

权利要求书

1.基于丝瓜转录组序列开发的EST-SSR核心引物组，其特征在于：所述引物组包括50对引物，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1～100所示。

2.根据权利要求1所述的基于丝瓜转录组序列开发的EST-SSR核心引物组在丝瓜种质资源遗传多样性分析中的应用。

3.根据权利要求1所述的基于丝瓜转录组序列开发的EST-SSR核心引物组在丝瓜品种遗传系谱中的应用。

4.根据权利要求1所述的基于丝瓜转录组序列开发的EST-SSR核心引物组在丝瓜品种鉴定中的应用。

5.利用权利要求1所述基于丝瓜转录组序列开发的EST-SSR核心引物组进行丝瓜种质资源遗传多样性分析、丝瓜品种遗传系谱或丝瓜品种鉴定的方法，包括如下步骤：

（1）提取待测丝瓜样品基因组DNA；

（2）以步骤（1）提取的待测样品DNA为模板，利用序列表SEQ ID NO.1～100所示引物进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；

（3）将步骤（2）的PCR扩增产物采用凝胶电泳检测，统计检测结果；

（4）利用步骤（3）的统计结果进行丝瓜种质资源遗传多样性分析、丝瓜品种遗传系谱或丝瓜品种鉴定。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述丝瓜种质资源遗传多样性分析或丝瓜品种遗传系谱分析方法为：使用NTSYS-pc 2.l0e软件进行基于UPGMA法的聚类分析；使用POPGENE软件计算各引物的等位基因数(Na)、 基因多样性（h）和Shannon值(I)。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述丝瓜品种鉴定方法为：统计每个品种在引物中的扩增情况，构建DNA指纹图谱，一一比较各引物位点差异，差异引物数≥2，判定两个品种为不同品种；差异引物数=1，判定两个品种为近似品种；差异引物数=0，判定两个品种为相同品种。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤（3）采用6%变性聚丙烯酞胺凝胶电泳检测，银染显色。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，20 μL PCR扩增反应体系包括：2 μL 10×buffer；0.5 μL Taq酶（2U · μL^-1）；0.4 μL dNTP（10mmol · L^-1）；上、下游引物各0.1 μL（50 pmoL ·μL^-1）；1 μL模板DNA（50 ng · μL^-1）；15.9μL ddH2O。

10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，PCR扩增程序为Touch-down PCR：94℃预变性3min；94℃ 30S，65℃（－1℃/cycle） 1min，72℃ 1min，15个循环；94℃ 30S，50℃ 1min，72℃ 1min，25个循环；72℃终延伸10min。