[发明专利]基于牛血清白蛋白-纳米铂模拟过氧化物酶测定乙酰胆碱的方法

权利要求书

1.一种基于牛血清白蛋白-纳米铂模拟过氧化物酶测定乙酰胆碱的方法，其特征是利用乙酰胆碱酯酶催化乙酰胆碱水解生成胆碱，胆碱氧化酶催化胆碱氧化生成过氧化氢，牛血清白蛋白-纳米铂催化过氧化氢氧化N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐）与4-氨基安替比林形成紫色产物以鉴定乙酰胆碱。

2.一种基于牛血清白蛋白-纳米铂模拟过氧化物酶测定乙酰胆碱的方法，其特征是在EP管中依次加入Tris-盐酸缓冲溶液、乙酰胆碱、乙酰胆碱酯酶，温浴后加入胆碱氧化酶、N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐、4-氨基安替比林和牛血清白蛋白-纳米铂，将混合液放入恒温水浴中反应，生成紫色产物，用紫外可见分光光度计测定反应产物的吸光度以测定乙酰胆碱。

3.根据权利要求1或2所述的基于牛血清白蛋白-纳米铂模拟过氧化物酶测定乙酰胆碱的方法，其特征是反应生成紫色产物的最大吸收峰为550 nm。

4.根据权利要求1或2所述的基于牛血清白蛋白-纳米铂模拟过氧化物酶测定乙酰胆碱的方法，其特征是牛血清白蛋白-纳米铂采用以下制备方法制得：在5 mL浓度为50 mg/ml 牛血清白蛋白水溶液中加入5 mL浓度为16 mmol/L的氯铂酸水溶液，混匀后加入0.5 mL浓度为1.5 mol/L氢氧化钠水溶液，80 ℃水浴加热2小时，所得溶液经过超滤并水洗，得到牛血清白蛋白-纳米铂水溶液;反应后溶液装入截止分子量为3k的超滤离心管，6000 r/min离心超滤，并水洗3次。

5.根据权利要求1或2所述的基于牛血清白蛋白-纳米铂模拟过氧化物酶测定乙酰胆碱的方法，其特征是乙酰胆碱的水解反应体系pH值为7.5，反应温度为37 ℃，反应时间为30分钟。

6.根据权利要求1或2所述的基于牛血清白蛋白-纳米铂模拟过氧化物酶测定乙酰胆碱的方法，其特征是恒温水浴中反应体系中N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐的浓度为0.2 mmol/L，4-氨基安替比林的浓度为4.2 mmol/L，牛血清白蛋白-纳米铂的浓度为9 μmol/L，胆碱氧化酶的浓度为0.125 U/mL。

7.根据权利要求1或2所述的基于牛血清白蛋白-纳米铂模拟过氧化物酶测定乙酰胆碱的方法，其特征是恒温水浴中反应体系的反应温度为30 ℃，反应时间为80分钟。

8.一种基于牛血清白蛋白-纳米铂的乙酰胆碱测定方法，其特征是将0.8 mL不同浓度的乙酰胆碱，0.1 mL浓度为10 U/mL的乙酰胆碱酯酶加入到0.95 mL浓度为50 mmol/L、pH=7.5的Tris-盐酸缓冲液中，混合液在37 ℃温浴水解反应30分钟，随后向混合液中依次加入0.25 mL浓度为2 U/mL的胆碱氧化酶，1 mL浓度为0.8 mmol/L的N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐，0.8 mL浓度为21 mmol/L的4-氨基安替比林，0.1 mL浓度为0.36 mmol/L的牛血清白蛋白-纳米铂，混合后在30 ℃温浴80分钟后测定显色产物在550 nm处的吸光度，以吸光度对乙酰胆碱浓度作图得到标准曲线，吸光度与乙酰胆碱浓度在10~200 μmol/L范围内呈线性关系，检测限为2.84 μmol/L。

9.一种基于牛血清白蛋白-纳米铂测定血浆乙酰胆碱的方法，其特征是在EP管中依次加入Tris-盐酸缓冲溶液、血浆样品、乙酰胆碱酯酶，温浴后加入胆碱氧化酶、N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐、4-氨基安替比林和牛血清白蛋白-纳米铂形成混合液，将混合液放入恒温水浴中反应，用紫外可见分光光度计测定在550 nm的紫外吸收，根据乙酰胆碱标准曲线计算血浆中乙酰胆碱含量。

10.根据权利要求9所述的基于牛血清白蛋白-纳米铂测定血浆乙酰胆碱的方法，其特征是将0.4 mL血浆样品，0.1 mL浓度为10 U/mL的乙酰胆碱酯酶加入到1.35 mL浓度为50 mmol/L、pH=7.5的Tris-盐酸缓冲液中，所形成的混合液在37 ℃温浴水解反应30分钟，随后向混合液中依次加入0.25 mL浓度为2 U/mL的胆碱氧化酶，1 mL浓度为0.8 mmol/L的N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐，0.8 mL浓度为21 mmol/L的4-氨基安替比林，0.1 mL浓度为0.36 mmol/L的牛血清白蛋白-纳米铂，混合后在30 ℃温浴80分钟后测定显色产物在550 nm处的吸光度，根据乙酰胆碱标准曲线计算血浆中乙酰胆碱含量。