[发明专利]ABC群脑膜炎球菌联合疫苗及其制备方法

权利要求书

1.ABC群脑膜炎球菌联合疫苗，其特征在于，其由A、C群脑膜炎球菌荚膜多糖分别与B群血清型4型脑膜炎球菌OMV共价结合的多糖-蛋白偶联物，以及B群ST-4821基因型脑膜炎球菌OMV组成；

所述A群脑膜炎球菌荚膜多糖分离自菌株编号为CMCC29201的A群脑膜炎球菌，所述C群脑膜炎球菌荚膜多糖分离自菌株编号为CMCC29205的C群脑膜炎球菌，所述B群血清型4型脑膜炎球菌OMV分离自菌株编号为CMCC29356的B群脑膜炎球菌，所述B群ST-4821基因型脑膜炎球菌OMV分离自保藏编号为CGMCC No.8982的B群脑膜炎球菌。

2.根据权利要求1所述的联合疫苗，其特征在于，每毫升疫苗中含有A群脑膜炎球菌荚膜多糖8-40μg，C群脑膜炎球菌荚膜多糖8-40μg，B群ST-4821基因型脑膜炎球菌OMV 10-80μg。

3.根据权利要求1所述的联合疫苗，其特征在于，疫苗分装于西林瓶或预充式注射器内密封保存。

4.根据权利要求1所述的联合疫苗，其特征在于，所述疫苗为液体剂型或冻干剂型。

5.根据权利要求4所述的联合疫苗，其特征在于，所述疫苗为液体剂型，任选含有铝佐剂。

6.根据权利要求5所述的联合疫苗，其特征在于，所述铝佐剂选自氢氧化铝、磷酸铝或硫酸铝。

7.根据权利要求4所述的联合疫苗，其特征在于，所述疫苗为冻干剂型，任选含有赋形剂。

8.根据权利要求7所述的联合疫苗，其特征在于，所述赋形剂选自乳糖、蔗糖、明胶、山梨醇或人血白蛋白。

9.根据权利要求7所述的联合疫苗，其特征在于，所述冻干剂型的疫苗，其稀释液是磷酸盐缓冲生理盐水、生理盐水，或含有铝佐剂的缓冲液或生理盐水，其中，每毫升稀释液中铝含量为0.05-0.80mg。

10.权利要求1-9任一项所述联合疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)A、C群脑膜炎球菌荚膜多糖的制备：分别向A、C群脑膜炎球菌液体培养上清液中加入十六烷基三甲基溴化铵沉淀多糖，离心获得荚膜多糖复合物，再向复合物中加入氯化钙或氯化钠解聚，然后用乙醇分步沉淀，获得粗制多糖，经脱氧胆酸钠处理，用Capto Adhere和Capto DEAE凝胶层析，收集流穿液，再经G25凝胶脱盐，或用苯酚抽提，超滤，除菌过滤后即得纯化的荚膜多糖，置-20℃以下或冻干后保存；

2)B群血清型4型及B群ST-4821基因型脑膜炎球菌OMV的制备：分别对B群血清型4型及B群ST-4821基因型脑膜炎球菌的液体培养液进行连续流离心，收获菌体，菌体经抽提分离出OMV复合物，经脱氧胆酸钠处理后，再依次经硫酸铵分步沉淀，乙醇分步沉淀，三氯醋酸沉淀，等电点沉淀，离子交换凝胶层析和疏水凝胶层析，G25凝胶层析，分子筛层析，超滤，除菌过滤后即得纯化的OMV，置2-8℃避光保存；

3)荚膜多糖-蛋白偶联物的制备：将步骤1)中制备的A、C群脑膜炎球菌荚膜多糖，分别经溴化氰活化后，在活化的糖链上连接已二酰肼，超滤去除游离的溴化氰、已二酰肼，然后加入步骤2)中制备的B群血清型4型脑膜炎球菌OMV作为蛋白载体，在ADH的桥联作用下分别形成A、C群脑膜炎球菌荚膜多糖-蛋白偶联物，经分子筛凝胶层析收集所述偶联物，除菌过滤后，置2-8℃避光保存；

4)疫苗配制：根据A群脑膜炎球菌荚膜多糖-蛋白偶联物的磷含量计算A群脑膜炎球菌荚膜多糖含量，根据C群脑膜炎球菌荚膜多糖-蛋白偶联物的唾液酸含量计算C群脑膜炎球菌荚膜多糖含量，根据B群ST-4821基因型脑膜炎球菌OMV的含量，配制ABC群脑膜炎球菌联合疫苗。