[发明专利]一种烟草白粉病菌生理小种的鉴别方法

说明书

技术领域：

本发明涉及农业生物技术领域，特别涉及一种烟草白粉病菌生理小种的鉴别方法。 

背景技术：

烟草白粉病俗称“上灰”、“下霜”、“上硝”。该病多为害成熟老叶，由下向上发展。叶片发病，初为近圆形的黄褐色小斑，后斑上现白色粉状小点，使病斑呈粉状，斑块扩大，白粉布满整个叶片，病叶先褪绿变褐，后枯死。严重时为害嫩茎，病茎上也布满白粉。病叶烘烤后薄如纸，丧失经济价值。中国各烟区均有发生，其中以华南、西南和华中烟区最为普遍，危害也较重。烟草白粉菌除为害烟草外，还可为害葫芦科、菊科等植物。发病部位以叶片为主，病斑多从下向上扩展。主要发生在大田期。病害症状为：幼苗受害后，叶上长满白粉，叶色变黄，逐渐干枯死亡。大田期成株发病，通常在比较老熟的叶片上先发生，从脚叶开始由下而上逐渐蔓延，很快遍及全株，被害的叶表面出现近圆形的病斑，然后整个叶呈灰色，着生一层白色物。严重时也危害嫩茎，后期病部组织变黄、变褐而枯死。病原为二孢白粉菌(Erysiphe cichoracearum DC.)，属于子囊菌亚门，核菌纲，白粉菌目，白粉菌属。苗期和成株期均可发生。但有性阶段很少发现。病菌菌丝具分隔，无色。无性态的分生孢子梗与菌丝垂直，丝状，较短，无分枝，大小约80-120×12-14微米，顶生分生孢子。分生孢子串生，由上而下顺次成熟，无色，单胞，圆筒形，大小为30-32×13-15微米。病菌生长适温22℃-28℃。分生孢子萌发最适温度23℃-25℃，最适相对湿度60％-80％。在相对湿度20％以下仍有少数孢子可以萌发，但在相对湿度100％或水滴中却极少能萌发。病菌属专性寄生菌，全部菌丝体长在寄主表面，以吸胞伸入寄主表皮细胞内吸取养分。病菌存在生理分化现象，有许多不同致病型，它们对不同寄主的致病力 差异很大。病菌寄主范围广，除烟草外，还能侵染葫芦科、菊科等100多种植物。传播途径：病菌在病残体、茄科寄主或再生烟上越冬，借风、雨进行传播。发病的最适温度为16-26℃、相对湿度为60-75％。施氮肥过多、烟株生长茂密、田间通风透光不良时，下部叶片易发病。该菌喜中温中湿的环境条件，反而高温高湿时，则不利于孢子的萌发和侵入。 

烟草白粉病不仅可造成烟叶质量大幅下降，而且还可引起烟株死亡，是为害烟草的重要病害之一。据报道侵染烟草的二孢白粉菌是异宗配合的，Morrison用多个相似的株系接种烟草叶圆片，5周后可获得成熟的子囊壳。研究资料还表明，二孢白粉菌包含2种类型，大概2个等位基因控制配合力；此外事实证明来自不同寄主植物的分离物构成了特殊遗传配合力的生理小种。这都证明烟草白粉病菌的生理小种会不断出现。如何阻止病菌变异和不断出现的新的强致病力生理小种，这是目前国际上科学家关注的热点问题之一。因此摸清目前烟草白粉病菌在我国发生的主要生理小种类型，是防治烟草白粉病的基础。 

近年来，分子标记技术如RAPD、AFLP、SSR、SCAR等已广泛应用于植物病原菌生理小种的分类、群体毒性与DNA多态性的研究(时焦等，2002)。Nicholson et al(1999)应用RAPD分析和DNA指纹鉴别了玉米小斑病菌O、C、T 3个生理小种。朴春根等(1996)应用了45个随机引物对我国小麦条锈病菌的6个生理小种进行RAPD分析，结果将供试小种分为两组。研究结果表明，RAPD分析是鉴定种属特异性、群体遗传结构和指纹图谱分析等的有效手段之一。但目前尚无将分子标记技术应用于烟草白粉病菌生理小种与遗传多态性研究的报道。 

生理小种是指种和变种内形态相同，但致病力等方面均有不同表现的群体，这些群体对不同品种的致病力可以存在差异。目前比较常用的传统的生理小种鉴定方法是采用鉴别寄主，配合生理生化特性研究的生物鉴定手段。如中国专利申请2010105435707公开了大麦白粉病菌致病型鉴别寄主体系的构建方法，该方法包括：(1)菌株的采集与病原菌毒性类型的划分；(2)备选大麦品种或品系的收集与鉴别；(3)备选鉴别寄主抗病性和病原菌致病性的测定；(4)鉴别寄主体系的建立等步骤。这种方法为传统的鉴别方法，存在时间长，误差大的缺点。而且，小麦为粮食作物，烟草为经济作物，其种 植地区，生长所需条件，物性本身属性等均不相同，所以，针对烟草用常规方法鉴别白粉病菌的生理小种效果不好。鉴于上述技术问题，需要探索出一种方法简单，鉴别准确，筛选快速的一种烟草白粉病菌生理小种的鉴别方法。此方法将生物鉴定与分子生物学鉴定相结合，弥补了烟草白粉病菌生理小种鉴别寄主体系与生理小种鉴别方法的空白，为烟草白粉病菌的研究提供了技术支撑，同时为烟草白粉病的防治与抗病育种奠定了理论基础。 

发明内容：