[发明专利]AFP158-166特异性TCR基因及其转基因T细胞及体外增殖方法及用途有效
| 申请号： | 201410201775.5 | 申请日： | 2014-05-13 |
| 公开（公告）号： | CN104087592A | 公开（公告）日： | 2014-10-08 |
| 发明（设计）人： | 何向辉;孙龙昊;章志翔;刘彤 | 申请（专利权）人： | 天津医科大学总医院 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/867;C12N5/10;A61K48/00;A61K39/00;A61P1/16;A61P35/00 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 陆艺 |
| 地址： | 300052 *** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | afp sub 158 166 特异性 tcr 基因 及其 转基因 细胞 体外 增殖 方法 用途 | ||
技术领域
本发明涉及基因工程领域，具体涉及AFP158-166特异性TCR基因、AFP158-166特异性TCR转基因T细胞、AFP158-166特异性TCR转基因T细胞的体外增殖方法及AFP158-166特异性TCR转基因T细胞在制备治疗肝癌药物中的应用。
背景技术
肿瘤特异性T细胞过继性细胞治疗(adoptive cell therapy，ACT)是肿瘤免疫治疗的最新进展。细胞免疫尤其是CD8+T细胞介导的特异性MHC-I类分子限制性细胞免疫功能在抗肿瘤免疫中起决定作用。T淋巴细胞通过特异性T细胞受体(Tcell receptor，TCR)识别肿瘤细胞表面抗原肽-MHC复合物而被激活。活化的T细胞可以直接溶解肿瘤细胞，或通过分泌细胞因子，如干扰素和肿瘤坏死因子，抑制肿瘤生长，阻止肿瘤血管生成。
分子生物学技术的进步使制备转基因T细胞成为可能，可以肿瘤特异性T细胞克隆分离获得其特异性TCR，通过病毒载体导入患者淋巴细胞，特异性TCR转基因T细胞具有MHC限制的细胞毒性，杀伤表达肿瘤相关抗原的肿瘤细胞，再以适当的方法体外大量扩增特异性TCR基因修饰的多克隆T细胞进行过继性免疫治疗，已在临床试验中取得一定疗效。
甲胎蛋白(alpha-fetoprotien，AFP)是原发性肝癌的肿瘤标志物，约有50％的肝癌患者的肿瘤细胞表达AFP。研究表明AFP含有多个MHC-I型限制性抗原表位，可激活细胞毒性T细胞。AFP158-166表位肽是其中之一，其可刺激从健康志愿者外周血分离的T细胞产生免疫应答。
过继性细胞治疗的另一障碍是特异性T细胞的体外扩增。有效的抗原递呈，共刺激信号的存在和适宜的细胞因子环境是体外诱导抗原特异性T细胞增殖的关键。目前的体外增殖系统需要将抗原，共刺激分子和细胞因子共同加入培养体系，或需要培养自体树突状细胞，其效率和经济性对细胞治疗的临床应用构成不利影响。B淋巴瘤细胞表达大量的MHC和共刺激信号分子，在体外易于培养，如果导入肿瘤抗原和细胞因子基因使其表达肿瘤抗原和细胞因子，放射线灭活的淋巴瘤细胞可望作为刺激细胞应用于T细胞的体外扩增。白介素-2(IL-2)是最常用的维持T细胞增殖的细胞因子，但最近的研究表明白介素-15(IL-15)能更有效的维持抗原特异性T细胞的功能。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供AFP158-166特异性TCR基因。
本发明的第二个目的是提供AFP158-166特异性TCR转基因T细胞。
本发明的第三个目的是提供AFP158-166特异性TCR转基因T细胞的体外增殖方法。
本发明的第四个目的是提供AFP158-166特异性TCR转基因T细胞在制备治疗肝癌药物中的应用。
本发明的技术方案概述如下：
AFP158-166特异性TCR基因，所述基因是序列表SEQ ID NO.1所示。
AFP158-166特异性TCR转基因T细胞，用下述方法构建：以AFP158-166特异性TCR基因构建AFP158-166特异性TCR慢病毒载体，感染多克隆T细胞建立AFP158-166特异性TCR转基因T细胞。
AFP158-166特异性TCR转基因T细胞的体外增殖方法，包括如下步骤：以人工抗原递呈细胞体外刺激AFP158-166特异性TCR转基因T细胞；所述人工抗原递呈细胞是AFP158-166抗原肽基因与IL-15基因在B细胞淋巴瘤系的协同表达。
AFP158-166特异性TCR转基因T细胞在制备治疗肝癌药物中的应用。
本发明的优点：
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