[发明专利]特异性针对甲型H3N2流感病毒的纳米抗体及其在诊断中的应用

说明书

技术领域

 本发明属于生物医学或生物制药技术领域，涉及特异性针对甲型H3N2流感病毒的纳米抗体、纳米抗体改造技术及其用于快速诊断试剂盒的研发。

背景技术

甲型流感病毒根据其表面的血凝素（HA）抗原的不同可以分为16个亚型（H1-H16），根据神经氨酸酶（NA）抗原的不同可以分为9个亚型（N1-N9）。流感病毒通过表面蛋白抗原性的累积改变(抗原漂移)或不同流感病毒发生基因重排而产生一种新的流感病毒(抗原转变)来逃避感染宿主的免疫识别，从而在感染群体中传播、繁衍。甲型H3N2流感是一种因甲型H3N2流感病毒引起的呼吸系统疾病。1968年香港爆发的H3N2流感至使百万人失去生命。2013年初，美国东部多个州爆发H3N2季节性流感，波士顿市政府于1月9日宣布公共卫生紧急状态。目前针对人间甲型H3N2流感大流行的防控措施主要采用化学药物和疫苗，但是化学药物的过量使用多产生的副作用及疫苗开发往往滞后于疫情暴发和疫苗只能对易感人群起预防作用的弊端显著。而由抗体介导的预防和诊断已显现良好的效果，其应用前景得到专家的认同。但是常规抗体仍然存在稳定性差，溶解性低及获得较麻烦等方面的问题。抗体药物的大分子特性制约了其广泛使用和疗效的发挥。一般的抗体能被消化系统很快降解，从而阻止了其进入大脑或一些肿瘤的外围，许多疾病无法用单克隆抗体药物治疗。

而纳米抗体是目前最小的抗体分子，其分子量是普通抗体的1/10，最初由比利时科学家Hamers，R在骆驼血液中发现，它是工程化抗体产品中备受关注的一类。它具有分子小、稳定性强、可溶性好、免疫原性低、易表达、易改造等独特优势，并且可根据应用的需要对其进行方便的个性化设计，方便偶联其他分子，是目前抗体产品开发的一大热点。纳米抗体已经发展成为有广泛生物应用价值和临床应用价值的通用分子，其应用涉及到疾病诊断和治疗、基础医学研究、生物学研究等多个领域。利用纳米抗体技术获得两株针对甲型H3N2流感病毒不同表位的纳米抗体，对其进行改造设计，用于快速检测抗原的诊断试剂盒研发。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供两株针对甲型H3N2流感病毒不同表位的纳米抗体，同时提供该纳米抗体在诊断试剂盒研发中的应用。

技术方案：为实现上述目的，本发明的第一方面，提供了一种H3N2纳米抗体的VHH链，包括框架区FR和互补决定区CDR，所述框架区FR由四个框架区组成，分别为分别为FRl、FR2、FR3和FR4，它们的氨基酸序列选自以下的氨基酸序列：

FR1为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，FR2为SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，FR3为SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列，FR4为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列；

或FR1为SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列，FR2为SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，FR3为SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列，FR4为SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列；

所述的互补决定区CDR由三个互补决定区组成，分别CDRl、CDR2和CDR3，它们的氨基酸序列选自以下的氨基酸序列：

CDR1为SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列，CDR2为SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列，CDR3为SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列；

或CDR1为SEQ ID NO.12所示的氨基酸序列，CDR2为SEQ ID NO.13所示的氨基酸序列，CDR3为SEQ ID NO.14所示的氨基酸序列。

优选地，所述的特异性针对甲型H3N2流感病毒的纳米抗体，它具有SEQ ID NO.15或16所示的氨基酸序列。

本发明第二方面，一种H3N2纳米抗体，它是特异性针对甲型H3N2流感病毒表位的纳米抗体，包括两条具有SEQ ID NO.15或16所示氨基酸序列的VHH链。

本发明第三方面，一种DNA分子，它编码选自下组的蛋白质：权利要求1或2所述的H3N2纳米抗体的VHH链，或权利要求3所述的H3N2纳米抗体。

优选地，所述的DNA分子，它具有选自下组的DNA序列：SEQ ID NO.17或18所示的氨基酸序列。

本发明的第四方面，一种表达载体，它含SEQ ID NO.17或18所示的核苷酸序列。

本发明的第五方面，一种宿主细胞，它可以表达针对甲型H3N2流感病毒的纳米抗体。

H3N2纳米抗体外源添加生物素以及偶联辣根过氧化物酶，并应用于快速检测试剂盒的研发。