[发明专利]三氮烯连接单元的合成及其在DNA测序中的用途

权利要求书

1.一种三氮烯连接单元，其结构式如式(I)所示：

2.根据权利要求1所述的三氮烯链接单元，其特征在于，-CH₂OH连接于三氮烯结构的邻位、对位或间位；-CH₂N₃连接于三氮烯结构的邻位、对位或间位。

3.一种根据权利要求1所述的三氮烯连接单元的合成方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

A、在酸性条件下，于亚硝酸钠水溶液中，冰浴下发生重氮化反应5min～2h后，缓慢加入得化合物A

B、在三乙胺存在的条件下，化合物TsCl和化合物A发生酯化反应，得到化合物B

C、在70～90℃下，NaN₃和化合物B发生取代反应，即得所述三氮烯连接单元

4.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，步骤B中，所述TsCl和化合物A的摩尔比为1∶(2.0～4.0)。

5.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，步骤C中，所述NaN₃和化合物B的摩尔比为(1.5～3.5)∶1。

6.一种根据权利要求1所述的三氮烯连接单元在DNA测序中的用途，其特征在于，所述三氮烯连接单元与核苷酸及荧光素连接得到用于DNA合成测序的可逆终端。

7.一种用于DNA合成测序的可逆终端，其特征在于，所述可逆终端由根据权利要求1所述的三氮烯连接单元与核苷酸及荧光素连接而得；所述可逆终端的结构式如下式所示：

8.一种根据权利要求7所述的用于DNA合成测序的可逆终端的制备方法，其特征在于，所述方法包含以下步骤：

A、以无水DMF为溶剂，在TEA存在的条件下，所述三氮烯连接单元与炔基化的TAMRA(5/6)发生点击反应，得化合物C

B、在DMAP、DIPEA存在的条件下，化合物C和DSC发生酯化反应，得到中间体所述中间体与dUTP(AP3)反应，即得所述可逆终端。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤A中，所述TAMRA(5/6)、三氮烯连接单元和TEA的摩尔比为1∶(1～3)∶(3～10)。

10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤B中，所述化合物C、DSC、DMAP、DIPEA和dUTP(AP3)的摩尔比为1∶(5～12)∶(2～3)∶(2～4)∶(2～8)。