[发明专利]四川泡菜中一种高产γ-氨基丁酸的短乳杆菌

说明书

技术领域：

本发明本发明属于食品生物技术领域，涉及泡菜中一种高产γ-氨基丁酸的短乳杆菌。

背景技术：

γ-氨基丁酸（γ- aminobutyric acid，简称GABA）是一种具有生物活性的非蛋白质氨基酸，是哺乳动物中枢神经系统中重要的抑制性神经递质。临床研究表明摄入GABA或者类似物可以降血压，抑制癌细胞生长、刺激癌细胞凋亡，还可以镇静安神，利尿。摄入富含GABA的食品可以有效的改善抑郁、失眠、精神分裂和长期饮酒导致的相关疾病。

乳酸菌是一类能利用碳水化合物发酵产生大量乳酸的细菌的总称。乳酸菌被广泛用于食品、医药等领域。其在食品发酵过程中可以赋予食品特殊的风味，改进食品的品质和营养的特性。乳酸菌是益生菌的主要来源，经科学研究证实许多乳酸菌是人体肠道固有的益生菌，具有调节肠道菌群、降低血清胆固醇、调节血压、抗氧化、抗癌和增强宿主免疫力等多种生理功能特性。天然食品中GABA含量比较低，传统发酵泡菜含有丰富的乳酸菌资源。

发明内容：

本发明的目的是提供一种从四川自然发酵泡菜水中分离出的具有高产GABA能力的短乳杆菌。

四川泡菜中一种高产γ-氨基丁酸的短乳杆菌，该菌分离于四川泡菜，具有在含谷氨酸钠的液体培养基中产生γ-氨基丁酸的能力，属于短乳杆菌（Lactobacillus brevis）。

工艺操作步骤为：

本发明短乳杆菌的获得：取回实验室的泡菜水用无菌生理盐水稀释到合适梯度，取1mL稀释液于无菌培养皿中，倾倒固体培养基混匀，培养至出现大量单菌落，挑取菌落，反复划线培养，进行纯化。

本发明提供的短乳杆菌自编号：p-14，保藏编号为CGMCC NO.9029，2014年4月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

本发明短乳杆菌具有产GABA能力：短乳杆菌p—14接种在液体培养基中，30℃发酵，采用薄层层析定性检测，其具有产GABA能力，用氨基酸自动分析仪测定发酵液中GABA含量达到了501mg/100g。

本发明短乳杆菌接种在经辐照灭菌的糙米粉中，30℃发酵3天，使糙米粉中GABA含量达到64.7mg/100g，比未发酵糙米粉提高了5倍。

本发明产GABA短乳杆菌具有良好稳定性，连续20次培养，性状稳定，仍具有高产GABA能力。

本发明的短乳杆菌p—4分离自四川传统自然发酵泡菜水，未经过人工诱变处理，属于公认安全（Generally Recognized As Safe，GRAS）菌种，可用于食品加工。

具体实施方式：

下面对本发明具体实施方式做一个详细的说明。

本发明高产GABA短乳杆菌的分离方法，采用梯度稀释混菌法从四川自然发酵泡菜水中分离。包括以下步骤：将1mL泡菜水用9mL无菌生理盐水进行梯度稀释,稀释到泡菜水浓度为10^-6-10^-8mL/mL，取1mL稀释液于无菌培养皿中，倾倒固体培养基并混匀，待培养基凝固后，置于30℃培养箱培养48—96小时，出现大量细菌菌落，挑取具有不同特征的单菌落，在分离培养基上划线纯化，并进一步培养，得到纯菌株。纯化的菌株采用2种方式保藏， 用液体培养基在30℃培养24—36小时后，在培养好的液体培养基中添加甘油，使甘油终浓度为20%（w/v），-20℃冻存，每隔1年转接一次；将菌种穿刺接种在半固体培养基中，30℃培养48小时后，放于4℃冷藏，每隔4个月转接一次。