[发明专利]一种人基因组DNA26个基因座的复合扩增的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种26个基因座的荧光标记复合扩增检验系统，具体是涉及一种同时分析人基因组常染色体及Y染色体基因座的五色荧光标记复合扩增系统，该系统可以应用于个体识别和亲子鉴定。 

背景技术

短串联重复序列基因座(STR)是目前普遍应用的遗传标记。90年代初STR基因座多态性的发现，特别是STR基因座具有片段小容易扩增，适宜于检验微量和降解检材，而且各基因座的扩增条件相似而能够复合扩增，因而具有灵敏、准确、快速、信息量大等优点。尤其是在建立DNA数据库方面，STR复合扩增技术具有极大的优越性。因此美国FBI选择了13个STR基因座用于建立DNA数据库—CODIS(Combined DNA Index System):CSF1PO、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、FGA、TH01、TPOX、vWA。这些STR基因座通常被称为13个核心基因座。 

正因为STR所具备的优点和应用前景，法医学界以及一些大的公司均投入大量的资金对其进行了开发性的研究。90年代中后期以美国AB公司为代表的研发商建立起荧光复合扩增体系。目前最具代表性的是ABI(Applied Biosystems,USA)公司的Identifiler^TM和Promega(USA)公司的PowerPlex-16荧光检测试剂盒。这两个试剂盒均包括上述13个核心基因座。 

人类Y染色体是小的近端着丝粒染色体，它由长臂和微小的短臂两部分组成。Y染色体，除拟常染色体区外，在减数分裂中不发生交换重组，呈单倍型独立向下传递，表现出父系遗传特征，同时序列的变异完全由累积的突变所致，并非重组引起。由于Y染色体的这些特点，Y染色体STR基因座(简称Y-STR)遗传标记作为一种工具已经被广泛应用于法医鉴定、亲权鉴定、失踪人员鉴定、人类迁移进化研究、历史和家系进化研究等多个领域。已发现的Y-STR基因座已有400多个，常用来检测的Y-STR基因座有9个欧洲最小单倍型基因座，包括DYS19、DYS385a/b、DYS389I/II、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393和2个美国DNA分析方法技术工作组(Scientific Working Group on DNA Analysis Methods，简称SWGDAM)推荐的基因座，包括DYS438、DYS439。 

在法医鉴定与亲子鉴定领域，DNA分析主要依赖商业化的试剂盒进行。第一个Y-STR试剂盒是由ReliaGene Technologies在2001年研发的Y-PLEX^TM6，可复合扩增DYS19、 DYS389II、DYS390、DYS391、DYS393、DYS385a/b；2002年ReliaGene Technologies又研发了可复合扩增DYS389I、DYS389II、DYS439、DYS438、DYS392的Y-PLEX^TM5，到2003年9月ReliaGene Technologies推出了整合了Y-PLEX^TM6和Y-PLEX^TM5所有基因座在内的Y-PLEX^TM12。同年10月，Promega公司推出了PowerPlex Y试剂盒，可复合扩增12个基因座，其中包括DYS19、DYS385a/b、DYS389I、DYS389II、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393、DYS437、DYS438、DYS439。2004年秋，Applied Biosystems公司(简称AB公司)发布了包含17个Y-STR基因座的Yfiler^TM试剂盒，其在PowerPlex Y的基础上增加了另外5个具有高度多态性的Y-STR基因座，即DYS456、DYS458、DYS635、Y GATAH4、DYS448。