[发明专利]一种鉴别雌核发育草鱼与普通草鱼的方法

权利要求书

1.一种鉴别雌核发育草鱼与普通草鱼的方法，其特征在于其具体步骤如下：

(1)取待测草鱼尾鳍，利用酚-氯仿抽提法提取基因组DNA；

(2)以步骤(1)中制得的基因组DNA溶液为模板，用5对微卫星引物对分别进行PCR扩增，制得PCR扩增产物，其中的5对微卫星引物序列如下：

AAGGAACAGCATAAACCGAAAT GGAACCAAGCATCTGAAACTG

TGTATCAGTAGTAGGCGGTTTA GTGTCGCTACCTCGCTAT

AAGTGAGACTATGCTGATAAAACCG ATTGAAACAGATGCCTGCTTG

CAGACGGATGGATGGATG CTTTCAAAATGTGGAGTCTTGC

AAAATCCCAGTGAGACAATC ATCCCATAATGCCTTGC；

(3)将步骤(2)的PCR产物用12％的非变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离，10V/cm电泳2h，用硝酸银溶液染色，氢氧化钠显色液显色，拍照记录电泳结果；

(4)根据步骤(3)的电泳图谱得到所述5个SSR标记在待测体内扩增的等位基因数，在5-7个之间则为雌核发育草鱼，在8-10个之间则为普通草鱼。

2.根据权利要求1所述的鉴别所述雌核发育草鱼与普通草鱼的方法，其特征在于所述步骤(2)中，进行PCR扩增时反应时，PCR反应体系为：总体积为20μL，其中含有10×反应缓冲液10μL,上下游引物各0.5μL,基因组DNA40ng,用灭菌双蒸水补足体积至20μL。

3.根据权利要求1所述的鉴别所述雌核发育草鱼与普通草鱼的方法，其特征在于所述步骤(2)中，PCR扩增反应程序为：94℃预变性5min，94℃30s，50-60℃30s，72℃30s，30个循环，72℃再延伸7min。

4.根据权利要求1或2或3所述的鉴别所述雌核发育草鱼与普通草鱼的方法，其特征在于所述步骤(3)中，所述硝酸银溶液的浓度为0.1％，每1升所述氢氧化钠显色液中含10gNaOH,1g无水NaCO3，5ml37％的甲醛。