[发明专利]一种辅助诊断2型糖尿病的检测试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及糖尿病的辅助诊断技术领域，特别涉及一种辅助诊断2型糖尿病的检测试剂盒及其使用方法。 

背景技术

糖尿病是一种常见的内分泌代谢性疾病，是由于血中胰岛素绝对或相对不足，导致血糖过高，出现糖尿，进而引起脂肪和蛋白质代谢紊乱，临床上可出现多尿、烦渴、多饮、多食，消瘦等表现，重者容易发生酮症酸中毒等急性并发症或血管、神经等慢性并发症。糖尿病的患病率随着生活条件的改善生活水平提高都呈逐渐增长的趋势。据统计，目前中国糖尿病患病人数接近一亿，患病率高达9.7％。糖尿病不是单一疾病，是由遗传及环境因素在内的多种因素共同作用的结果。其中2型糖尿病发病人数约占糖尿病总发病人数的97％。2型糖尿病过去主要在超过40岁的成年人中发病，而现在2型糖尿病的发病正趋向低龄化。 

目前国内外对2型糖尿病机制的研究也越来越多。单核苷酸多态性(SNP)是指基因组DNA中某一特定核苷酸位置上发生转换、颠换、插入或缺失等变化，是第三代分子标记。据估计，大约有10亿个SNP分子标记将被用于基因功能及与疾病的相关性的关联研究。而关于2型糖尿病分子机制CpG-SNP方面的研究甚少。CpG-SNP是指可以发生CG突变的SNP位点。已有相关研究报道表明2型糖尿病的发生与CpG-SNP有关，主要是SNP的突变通过对CpG位点的DNA甲基化影响而干扰基因功能的表达。一些CpG位点的引入或消除可能是2型糖尿病的发生密切相关。胰岛素信号通路是与2型糖尿病发生密切相关的一条通路。 

PDPK1、GCK、PIK3R2、MAPK9、CBLC、MKNK2、FLOT2、TRIP10、KRAS属于胰岛素通路中的一部分基因。PDPK1主要编码3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)蛋白，而PDPK1蛋白可以调节AGC家族中部分重要的蛋白激酶，包括蛋白激酶、血清和糖皮质激素诱导激酶；GCK编码葡萄糖激酶，而葡萄糖激酶是促进葡萄糖磷酸化形成葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的关键酶；PIK3是PI3K/AKT通路中的一个重要基因，PI3K/AKT通路参与体内血糖稳态的调节；MAPK9编码的JNK2蛋白与胰岛beta细胞的破坏有关，也参与调节Th1/Th2免疫细胞；CBLC编码的蛋白属于Cb1家族，也参与了氰钴胺素细胞内代谢，它与糖尿病酮症酸中毒相关；MKNK2参与了胰岛素信号通路对胰岛素信号的调节，它的过度表达会抑制胰岛素抵抗；FLOT2编码的蛋白与细胞内小泡运输和信号转导有关；TRIP10可以 通过PI3K/AKT通路促进糖诱导的间质上皮转化；KRAS编码的蛋白属于GTP酶家族中的一员，GTP酶参与了糖代谢。 

但目前，国内外还没有公开任何用于检测该胰岛素通路PDPK1基因rs76318740单核苷酸多态性、GCK基因rs12702070单核苷酸多态性、PIK3R2基因rs3736328单核苷酸多态性、MAPK9基因rs1363513单核苷酸多态性、CBLC基因rs2965143单核苷酸多态性、MKNK2基因rs3810412单核苷酸多态性、FLOT2基因rs4795473单核苷酸多态性、TRIP10基因rs340141单核苷酸多态性、KRAS基因rs7311692单核苷酸多态性与2型糖尿病相关程度的试剂盒的相关研究报道。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状，提供检测方便、检测准确率高的一种辅助诊断2型糖尿病的检测试剂盒；通过基因引物对样品DNA进行PCR扩增，并建立熔解曲线与标准熔解曲线相比较得出结论，其检测方法简单、高效。 

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为： 

一种辅助诊断2型糖尿病的检测试剂盒，所述的检测试剂盒包含用于检测PDPK1基因、GCK基因、PIK3R2基因、MAPK9基因、CBLC基因、MKNK2基因、FLOT2基因、TRIP10基因及KRAS基因单核苷酸多态性的引物，所述的单核苷酸多态性分别为rs76318740、rs12702070、rs3736328、rs1363513、rs2965143、rs3810412、rs4795473、rs340141及rs7311692，所述的引物包括： 

PDPK1基因特异性上游引物一： 

5’-gcgggcagggcggcCAGCTGCCCCTCTCTCCCc-3’； 

PDPK1基因特异性上游引物二：5’-gattaccg CAGCTGCCCCTCTCTCCCt-3’； 

PDPK1基因下游引物：5’-AGAAAGCATCTGAGCAGGCACCAG-3’；