[发明专利]一株在低温下具有较高除磷效果的聚磷菌及其筛选方法和应用

权利要求书

1.一株在低温下具有较高除磷效果的聚磷菌，其特征在于，所述聚磷菌的保藏号为CCTCC NO:M2014140。

2.一种筛选在低温下具有较高除磷效果聚磷菌的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）分别配制培养基A、B和C：

培养基A为菌株分离、纯化、保藏培养基，其组成为：每升培养基A包含蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠5g，琼脂19g，其余为水，调节pH至7.0-7.2，

培养基B为预培养基，其组成为：每升培养基B包含乙酸钠2g，Na₂HPO₄46mg，NH₄Cl152.8mg，CaCl₂8.3mg，MgSO₄82mg，K₂SO₄17.83mg，HEPES7g，微量元素2mL，其余为水，调节pH至7.0-7.2；

培养基C为富磷培养基，其组成为：每升培养基C包含乙酸钠1g，MgSO₄82mg，FeSO₄3.7mg，CaCl₂60mg，(NH₄)₂SO₄0.2g，牛肉膏0.22g，K₂HPO₄74mg，微量元素2mL,其余为水，调节pH至7.0-7.2；

所述微量元素的组成为：每升微量元素包含FeCl₃0.9g，H₃BO₃150mg，CuSO₄30mg，KI180mg，MnCl₂60mg，ZnSO₄120mg，CoCl₂140mg，Na₂MoO₄60mg，乙二胺四乙酸10g，其余为水；

（2）富集培养

取活性污泥0.5g加到100mL无菌水中于6℃－10℃振荡培养24h，取10mL振荡培养后的混合液转接到100mL磷浓度为5mg/L的培养基A中，5-9℃富集培养，每培养2d转接一次，每转接一次培养基A中的磷浓度提高5mg/L，共转接4次，富集培养8d，得到富集培养液；

（3）分离纯化

将所述富集培养液至稀释度达到10^-6，吸取0.5ml稀释液于分离纯化平板中，在40℃－42℃下与培养基A混合，凝固后倒置，于8℃恒温培养出菌落；挑取所述平板上的单菌落在平板上进行多次划线纯化，至显微观察显示无杂菌，即得到纯化菌株；

（3）筛选

将所述纯化菌株接种于装有100mL培养基B的锥形瓶中，在130r/min，8℃下振荡培养24h，得预培养液，将所述预培养液按10%转接到装有100mL培养基C的锥形瓶中，在130r/min，8℃下振荡培养2d；其中先厌氧培养24h再好氧培养24h；培养完成后取培养液10000r/min离心10min取上清液，测定上清液的总磷浓度，考察菌株对总磷的去除率，从而筛选出的在低温下具有较高除磷效果的聚磷菌。

3.权利要求1所述聚磷菌在废水处理中的应用。

4.根据权利要求1所述的一株在低温下具有较高除磷效果的聚磷菌，其特征在于，所述聚磷菌16SrDNA序列如SEQ ID NO:1所示。