[发明专利]一种检测微小核糖核酸与胃癌组织的相关程度的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药检测方法技术领域，尤其涉及一种检测微小核糖核酸与胃癌组织相关程度的检测方法。

背景技术

胃癌是一种世界范围内的普通癌症，但在东亚地区属于高发癌症。常年以来，医疗工作者在胃癌的发病机理和新的诊断标志物和治疗目标方面做了大量研究，然而在胃癌的发病机理方面仍没有突破进展。近年来，在传统的癌症基金和肿瘤抑制基因的研究已经拓展到一个新的种类——微小核糖核酸（microRNAs）,微小核糖核酸（以下称miR）的发现提供的一种研究治疗癌症的新的契机。miR作为新发现的基因表达调控因子，是一类分布广泛的小的非编码蛋白质的RNA，可抑制靶基因转录或蛋白翻译从而沉默靶基因的表达。近年来众多研究表明miR在肿瘤转移的过程中起到了关键作用，其主要以干预mRNA翻译的方式负向调控基因的表达，参与肿瘤转移的发生发展。研究表明，某些miR在不同肿瘤表达具有特异性，可作为某些肿瘤诊断的标志物，从而提高肿瘤的诊断和治疗，为人类肿瘤治疗提供了新的方向和手段。

有研究表明，miR-433在多种肿瘤组织中低表达，其特异性的表达水平降低与肿瘤的发生、发展具有相关性。有研究发现miR-433可以通过抑制cAMP应答元件CREB1进而抑制肝癌细胞的生长和迁移，并且发现miR-433可能与miR-127一起参与了肝癌的发生和发展。miR-433在肝癌组织低表达，并且还抑制了肝癌细胞的生长与分化。miR-433对胃癌细胞系HGC-27的生长，细胞周期，细胞迁移及细胞侵袭具有显著的抑制作用，其可能是通过KRAS和MAPK4信号通路对细胞生物学行为进行调节的。

发明内容

为了研究微小核糖核酸与胃癌组织的相关程度，本发明提出了一种新的检测微小核糖核酸与癌症组织相关程度的检测方法。

本发明提出的一种检测微小核糖核酸与癌症组织相关程度的检测方法，其检测过程为：

1、标本的准备：选取手术切除的胃癌标本80例，每例标本均留取肿瘤组织和距肿瘤边缘5cm以上的配对癌旁组织；手术标本离体后，于20-35min内液氮速冻，保存于-80℃冰箱备用；根据2010年国际抗癌联盟制定的TNM分期标准进行临床分期I，II，III和IV期各20例；所有病例均确诊为胃癌，临床资料完整，均未接受放化疗。

2、组织总RNA的提取：采用Trizol裂解细胞，具体步骤参照说明书操作，分别提取胃癌组织及配对癌旁组织总RNA；分光光度计测定RNA浓度，琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA的完整性。

3、逆转录合成cDNA第一链：逆转录过程按照所购逆转录试剂盒的操作说明书进行。

4、荧光定量聚合酶链反应（qPCR）：荧光定量聚合酶链反应（qPCR）体系使用了miR和内参U6引物以及PCR试剂盒；PCR程序为95℃10min，95℃10s，60℃20s，72℃42s共40个循环，并进行溶解曲线检测；所有样品均做3个重复，阴性对照以水代替cDNA模板。

5、用统计学方法进行数据分析：数据均以均数±标准差表示，应用SPSS18.0统计软件分析，计量资料采用独立样本t检验或配对设计t检验。

优选的：所述RNA抽提试剂Trizol购自美国Invitrogen公司，cDNA逆转录试剂盒（All-in-One^TMmiRNAFirst-StrandcDNASynthesisKit）和SYBRGreenIqPCR试剂盒（All-in-One^TMmiRNAqPCRKit）均购自广州复能基因有限公司。qPCR仪为美国ABI7500系统。

优选的：所述荧光定量聚合酶链反应（qPCR）体系中的miR为miR-433。

优选的：所述荧光定量聚合酶链反应（qPCR）体系中的miR-433和内参U6引物以及PCR试剂盒（All-in-One^TMmiRNAqPCRKit）均购自广州复能基因有限公司。

附图说明

下面结合附图对本发明做进一步的说明：

图1为溶解曲线分析miR-433扩增效率和内参U6扩增效率。

下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。

具体实施方式

本发明提出的一种检测微小核糖核酸与癌症组织相关程度的检测方法，其检测过程为：