[发明专利]重组杆状病毒及其表达的SjHMGB1重组蛋白和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种含日本血吸虫高迁移率族蛋白B1基因(SjHMGB1)的重组杆状病毒及其表达的SjHMGB1重组蛋白和应用。

背景技术

日本血吸虫病是一种由日本血吸虫引起的，分布广泛且危害严重的人畜共患寄生虫病。在我国，该病的流行区主要集中在南方各省，影响疫区的经济社会发展，是一项亟待解决的公共卫生问题。长期的血防实践表明，传统的药物治疗并不能解决频繁出现的重复感染问题，使得人畜的重复感染问题尤为突出。因此，实现对该病长期有效的控制依赖于高效安全疫苗的研制应用。

目前在所有研制的疫苗中，辐照致弱的血吸虫尾蚴/童虫疫苗免疫的动物模型具有较高的免疫保护效果，但其作为疫苗应用存在材料来源困难、安全性等问题。因此，模拟辐照致弱血吸虫尾蚴或童虫疫苗(RAV)诱导的高保护性效应机制来研发高效而又安全的分子疫苗，可能是突破上述难题的有效策略之一。而研究RAV的免疫原性的分子细胞基础及机制等问题是解释RAV的高保护性效应机制的切入点之一。根据已有研究推断，在RAV血吸虫疫苗模型中，存在一类虫源性的分子如HMGB1、CRT和HSP70等发挥关键作用。它们可能通过与宿主DC作用，形成引发和驱动保护性先天免疫和适应性免疫应答的环境。为了评价sjHMGB1是否具有相关的免疫生物学功能，必须获得一定数量的虫源或重组sjHMGB1蛋白。而虫源材料来源限制性较强，故一般选择原核或真核表达系统来获得目的蛋白，但是原核表达的重组蛋白可能有内毒素影响，因此，需要用真核表达系统来获得重组sjHMGB1蛋白。

到目前为止，还没有出现关于日本血吸虫sjHMGB1重组蛋白作为抗血吸虫疫苗应用的研究报道。

发明内容

本发明要解决目前缺乏安全、高效的抗血吸虫疫苗的技术问题，提供一种含日本血吸虫高迁移率族蛋白B1(SjHMGB1)基因的重组杆状病毒，该重组杆状病毒在昆虫细胞中能成功表达出SjHMGB1蛋白，该重组表达的SjHMGB1蛋白构象上更接近天然蛋白，具有良好的生物学特性，适于作为抗血吸虫的疫苗。

此外，还需要提供一种上述重组杆状病毒表达的SjHMGB1重组蛋白和应用。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现:

在本发明的一个方面，提供了一种重组杆状病毒，该重组杆状病毒包含：编码SEQ ID NO.1所示SjHMGB1蛋白氨基酸序列的核苷酸序列。

优选的，所述重组杆状病毒包含SEQ ID NO.2所示SjHMGB1基因核苷酸序列。

在本发明的另一方面，还提供了一种包含上述重组杆状病毒的细胞。

在本发明的另一方面，还提供了一种重组蛋白，该重组蛋白是由上述重组杆状病毒经表达而制得的SjHMGB1重组蛋白。

本发明的重组蛋白，包含日本血吸虫HMGB1蛋白的氨基酸序列，还包含由部分载体序列表达的具有几个组氨酸的标签序列，该标签序列仅是便于后续的重组蛋白纯化。

在本发明的另一方面，还提供了一种包含上述日本血吸虫重组蛋白的抗血吸虫疫苗。

在本发明的另一方面，还提供了一种能与上述日本血吸虫重组蛋白特异性结合的抗体。

在本发明的另一方面，还提供了一种上述重组杆状病毒在制备预防或治疗血吸虫病的疫苗或药物中的应用。

在本发明的另一方面，还提供了一种上述重组蛋白在制备预防或治疗血吸虫病的疫苗或药物中的应用。

本发明的重组杆状病毒，利用杆状病毒的呈递作用，在昆虫细胞中能成功表达出日本血吸虫HMGB1重组蛋白，该昆虫细胞中表达的SjHMGB1蛋白由于翻译后的精确修饰和正确折叠，保持了其抗原性与可溶性，在构象上更接近天然蛋白，可用于研制抗血吸虫疫苗，具有广阔的应用前景。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

图1是本发明实施例1的SjHMGB1的PCR扩增电泳图；

图2是本发明实施例1的pFastBacHTA-SjHMGB1转移载体的双酶切鉴定结果图；

图3是本发明实施例1重组杆状病毒穿梭载体reBacmid-SjHMGB1的PCR鉴定图；

图4是本发明实施例2间接免疫荧光检测SjHMGB1在Sf9细胞中的表达结果图；

图5是本发明实施例2的SjHMGB1重组蛋白的Western blot鉴定结果图；