[发明专利]法氏囊活性肽BPP-II特异性结合肽及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种法氏囊活性肽BPP-II特异性结合肽，以及法氏囊活性肽BPP-II特异性结合肽的应用，属于蛋白质多肽技术领域。

背景技术

法氏囊（bursa of Fabricus，BF）是公认的禽类特有的中枢免疫器官，是B细胞分化发育和抗体产生的场所，对禽类体液免疫具有至关重要的作用。学者们对法氏囊的形态发生学、免疫学以及组织提取物的生物学活性等方面进行了广泛而深入的研究，发现法氏囊组织中存在多种活性分子，目前已从法氏囊中分离出多种法氏囊活性小肽如BSP-I、BSP-II、BHP、BTP、BPP-I、BP11、BP5等。研究发现，法氏囊活性肽大多具有免疫调节功能，有些还具有抗肿瘤潜能。

法氏囊活性肽BPP-II是从鸡的法氏囊中分离得到一种新型的免疫调节肽，分子量小，结构简单，其氨基酸组成顺序为Met-Thr-Leu-Thr-Gly。一些研究者对BPP-II的生物学活性进行了研究，结果发现BPP-II能够提高机体抗体水平，调节Th1型和Th2型免疫反应，促进淋巴细胞增殖，调节体液免疫和细胞介导的免疫应答，且在一定浓度下抑制MCF-7细胞、Hela细胞等肿瘤细胞的增殖，是一种多功能生物活性分子。

噬菌体随机肽库技术是一种高效、简便的淘选工具，能够将编码外源肽的DNA序列插入噬菌体编码外壳蛋白的基因中，使大量的随机肽段以融合蛋白的形式展示在噬菌体表面，是研究蛋白质分子间相互作用的有效手段，近年来广泛应用于生物活性肽、肽类药物筛选、抗原模拟表位筛选等研究领域。据资料证实，具有生物学功能的免疫因子大多是通过与细胞膜受体相互作用或通过受体介导而发挥生物学功能，如生长因子、胸腺五肽TP5等。BPP-II作为一种多功能免疫因子，其发挥生物学功能的机制尚不清晰。因此利用噬菌体展示技术筛选BPP-II特异性结合肽，并研究BPP-II结合肽是否对BPP-II的生物学功能有所影响。对BPP-II抑制剂的研究开发及应用具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种法氏囊活性肽BPP-II特异性结合肽。

同时，本发明还提供一种法氏囊活性肽BPP-II特异性结合肽的应用。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：

一种法氏囊活性肽BPP-II特异性结合肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示。

上述三条均为短肽，其中短肽1：QSLPSPLWIQQS，短肽2：DRMPDSAWTTRK，短肽3：ALWPPNLHAWVP。

一种法氏囊活性肽BPP-II特异性结合肽的应用，具体的，法氏囊活性肽BPP-II特异性结合肽在制备抑制法氏囊活性肽BPP-II抗肿瘤细胞增殖的药物方面的应用。

所述的肿瘤细胞为淋巴瘤细胞，具体为小鼠WEHI-231B淋巴瘤细胞。

本发明的有益效果：

本发明以BPP-II-BSA融合蛋白作为靶分子，通过噬菌体随机12肽库筛选，结合ELISA鉴定和竞争抑制试验，获得与BPP-II特异性结合的噬菌体，进行序列测定，人工合成BPP-II特异性结合肽。由此筛选得到的结合肽能与法氏囊活性肽BPP-II特异性结合，且在一定浓度下抑制BPP-II对小鼠WEHI-231B淋巴瘤细胞增殖活性。标准MTT法检测BPP-II特异性结合肽抗BPP-II对小鼠WEHI-231B淋巴瘤细胞增殖功能的影响，分析结果发现：短肽1、2、3本身对鸡DT40细胞的增殖均无明显影响；短肽1肽在2μg/mL和20μg/mL浓度下能够显著抑制BPP-II对WEHI-231细胞增殖功能（P<0.05）；短肽2和短肽3在20μg/mL浓度下能够显著抑制BPP-II对WEHI-231细胞增殖功能（P<0.05）；表明3个BPP-II特异性结合肽在一定浓度下均可抑制BPP-II抗小鼠WEHI-231B淋巴瘤细胞增殖活性。为BPP-II抑制剂的研究开发及应用奠定了基础，具有良好的应用前景。

附图说明

图1为本发明实施例1中ELISA检测噬菌体展示肽对靶分子的结合活性；

图2为实施例1中噬菌体阳性克隆竞争抑制试验结果；

图3为试验例中BPP-II对小鼠WEHI-231B淋巴瘤细胞增殖的影响；

图4为试验例中BPP-II特异性结合肽对WEHI-231细胞增殖的影响；

图5为试验例中BPP-II特异性结合肽对BPP-II抗WEHI-231细胞增殖功能的影响；