[发明专利]基于土壤动物区系去除的转基因植物种植风险评价方法

权利要求书

1.一种基于土壤动物区系去除的转基因植物种植风险评价方法，其特征在于，包括步骤：

1)去除动物区系：将转基因植物种植区农田原位土壤取出后，过2mm筛，剔除大土块，然后进行高温灭菌，对整个动物区系进行去除，之后分装到容器中，土壤填入10cm深；

2)添加土壤滤液：将土壤滤液20ml添加到去除土壤动物区系的原位土壤中，还原微生物区系；

3)植物种植：将转基因植物和对照品种种子分别种植到步骤2)处理后得到的农田土壤中；

4)添加试验动物：在已种植转基因植物及对照品种的容器中添加试验动物，每个容器添加实验室培养的单一土壤动物类群10头个体；

5)取样：添加试验动物后20天、35天、70天进行取样，利用体视镜进行人工计数，采集试验动物种群数量，计算存活率、单一世代和多世代繁殖率，比较种植转基因植物和对照品种的土壤，评估转基因植物种植对单一土壤动物类群适合度的影响。

2.根据权利要求1所述的转基因植物种植风险评价方法，其特征在于，所述步骤1)高温灭菌的条件为110-120℃，25-35min。

3.根据权利要求1所述的转基因植物种植风险评价方法，其特征在于，所述步骤2)中土壤滤液按如下方法制备：原位根际土100g，加500ml蒸馏水搅匀后静置24小时，依次用1mm，180μm，75μm，45μm，45μm和20μm孔径的筛网进行过滤，滤掉土壤动物成体及卵。

4.根据权利要求1所述的转基因植物种植风险评价方法，其特征在于，所述步骤3)中每个作物品种设置5个重复。

5.根据权利要求1-4任一所述的转基因植物种植风险评价方法，其特征在于，所述步骤3)中植物种植后，将种植环境设置为植物和土壤动物的最适温度和湿度重合区间,具体为温度15-25℃和湿度50％-75％。

6.根据权利要求1-4任一所述的转基因植物种植风险评价方法，其特征在于，所述步骤3)中植物种植后，将种植环境设置为温度增加2℃和湿度增加25％，具体为温度17-27℃和湿度75％-100％。

7.根据权利要求1所述的转基因植物种植风险评价方法，其特征在于，所述步骤4)中单一土壤动物的培养方法为：在石膏：活性炭＝9:1的培养皿中培养，添加啤酒酵母作为食物，全黑暗培养，培养温度为20±1℃，相对湿度90-100％，每周用去离子水调节一次，保持整个培养基湿润。

8.根据权利要求6所述的转基因植物种植风险评价方法，其特征在于，单一土壤动物的培养后需要同步化，将三天内产的卵收集到一起，卵孵化成幼虫后的第12天，将幼虫添加到已经种植的转基因植物及对照品种的容器中。

9.根据权利要求6所述的转基因植物种植风险评价方法，其特征在于，所述单一土壤动物选自根结线虫、跳虫、变形虫或螨虫。