[发明专利]一种狄斯瓦螨毒性蛋白及其编码基因和应用

说明书

技术领域：

本发明属于生物化学与分子生物学领域，具体涉及一种狄斯瓦螨毒性蛋白及其编码基因和应用。

背景技术：

狄斯瓦螨一直是世界养蜂业最主要的危害之一，目前全球范围内仅澳大利亚未发现(周婷，2005；Rosenkranz et al.,2010)。狄斯瓦螨吸食蜜蜂成蜂或幼虫的体液，造成蜜蜂体质下降，同时降低蜜蜂的认知能力与方向感(Kralj et al.,2007)，降低出勤蜂返巢率，缩短蜜蜂的寿命(Dainat et al.,2012)，蜂群群势衰弱。最主要的是狄斯瓦螨还传播蜜蜂细菌和病毒病害(Tentcheva et al.,2004；Yan et al.,2009；Prisco et al.,2011,Ai et al.,2012)，并通过抑制宿主免疫抑制反应激活这些潜伏病毒(Yang&Cox-foster,2005；Santillán-Galicia et al.,2008)。在美国、希腊等国出现的蜜蜂蜂群崩溃失调病(CCD)造成世界恐慌，引起科学家的高度重视，经研究其发病原因与蜂螨的危害有关(Cox-Foster et al.,2007)。每年我国养蜂业仅蜂螨造成的直接损失就达到几亿人民币，而且因防治蜂螨使用药物造成蜂产品污染(王强等，2006；吴杰等，2007；周婷等，2007)和狄斯瓦螨抗药性及药物残留对环境的影响更是无法估量(胡福良等，2004；黄文诚，2005；Satta et al.,2005；曾志将等,2007；Adamczyk et al.,2010；Damiani et al.,2011；González-Gómez et al.,2012)。

随着狄斯瓦螨的扩散，以及与宿主之间的相互适应，某些意大利蜂和非洲化意蜂(Africanized Apis mellifera)也表现对狄斯瓦螨的耐受性(Aumeier et al.,2000；Navajas et al.2008；Le Conte et al.,2011)。因此，研究者又一次将目光聚集在蜜蜂对狄斯瓦螨的耐受性研究方面，并且认为有效的清洁行为是最重要的耐受因素(Moretto et al.,2006；Calderón et al.,2009；Le Conte et al.,2011)。但是清洁行为是如何控制的呢？是嗅觉吗？因为狄斯瓦螨在刺吸食物时分泌的唾液中可能含有某种物质使得蜜蜂能够感知螨的存在。而事实上中蜂只有在狄斯瓦螨刚进入蜂房或者移动的时候反应强烈，而狄斯瓦螨静止不动的时候蜜蜂不能够感知的(Rath,1999)，通过分子生物学手段比较意蜂清洁蜂的转录组也不支持清洁蜂有更强的嗅觉灵敏度(Le Conte et al.,2011)，并指出有可能是蜜蜂的群体免疫力使得蜂群耐受狄斯瓦螨。et al.(2012)则认为意蜂的清洁行为是基于受损伤的幼虫(狄斯瓦螨与DWV病毒共同导致的残翅)，属于蜜蜂的免疫反应。作为原始寄主的中华蜜蜂与狄斯瓦螨在长期相互适应的过程中产生耐受性，受到广泛关注。

而在我国饲养广泛的中华蜜蜂(A.cerana)却很少遭受狄斯瓦螨的毁灭性破坏。大量文献表明，作为原始寄主的中华蜜蜂与狄斯瓦螨在长期相互适应的过程中产生耐受性，中华蜜蜂将狄斯瓦螨种群控制在800只/箱以内，则可以维持蜂群的稳定(Penget al.,1987a,b；Delfinado-Baker&Peng,1995；Rath,1999)。研究表明，影响中蜂群内狄斯瓦螨种群大小的因素主要有三个方面：狄斯瓦螨繁殖力(Reproduction)，中华蜜蜂的抗螨行为以及狄斯瓦螨的自然死亡。影响狄斯瓦螨繁殖力的因素有：1)雌螨的生育力；2)蜜蜂蛹的封盖历期；3)蜜蜂幼虫的吸引力；4)巢房大小。中华蜜蜂的抗螨行为有理毛行为(grooming behaviour)和清洁行为(Hygienic behaviour)(Rath，1999)。早期文献(Rothenbuhler,1964)对清洁行为的定义是比较狭隘的，单纯指中蜂“打开房盖并移走受感染的病虫”。但是这种开盖及移走行为不是专门针对瓦螨的，而是普通的清理行为，针对所有的外来物质或者受微生物危害的幼虫。后来，Rath(1999)对此进行了补充，把清洁行为定义为“开盖，移走及埋葬幼虫”的行为。蜜蜂能够很快移走工蜂房中的死幼虫而雄蜂房中的死幼虫则很难被移走，中蜂的工蜂让死亡的雄蜂幼虫留在房内而不去开盖(雄蜂房有厚厚的茧也不容易打开)，从而埋葬了受狄斯瓦螨感染或患病致死的雄蜂幼虫。

发明内容：