[发明专利]人胚胎干细胞的分化

权利要求书

1. 一种使多能干细胞群分化成表达胰腺内胚层谱系特征性标志物的细胞群的方法，所述表达胰腺内胚层谱系特征性标志物的细胞群共表达PDX-1、NKX-6.1，但不表达CDX-2和NGN-3，所述方法包括下列步骤：

a. 培养所述多能干细胞，

b. 使所述多能干细胞分化成表达定形内胚层谱系特征性标志物的细胞，以及

c. 通过用补充有FGF7的第一培养基处理表达定形内胚层谱系特征性标志物的细胞，然后将所述细胞在补充有FGF7、能够抑制BMP的因子、激活素A、视黄酸和刺猬蛋白信号传导通路抑制剂的第二培养基中培养，使所述表达定形内胚层谱系特征性标志物的细胞分化成表达胰腺内胚层谱系特征性标志物的细胞，所述表达胰腺内胚层谱系特征性标志物的细胞共表达PDX1、NKX6.1，但不表达CDX2和NGN3，

其中所述多能干细胞是确立的多能干细胞系。

2. 权利要求1的方法，其中FGF7按以下浓度使用：

a. 约50pg/ml至约50μg/ml的浓度；或

b. 50ng/ml的浓度。

3. 权利要求1的方法，其中能够抑制BMP的因子为成头蛋白。

4. 权利要求3的方法，其中成头蛋白按以下浓度使用：

a. 约500ng/ml至约500μg/ml的浓度；或

b. 100ng/ml的浓度。

5. 权利要求1的方法，其中激活素A按以下浓度使用：

a. 约2ng/ml至100ng/ml的浓度；

b. 20ng/ml的浓度；或

c. 50ng/ml的浓度。

6. 权利要求1的方法，其中视黄酸按以下浓度使用：

a. 约1nM至约1mM的浓度；或

b. 约1μM的浓度。

7. 权利要求1的方法，其中刺猬蛋白信号传导通路抑制剂为环巴胺-KAAD。

8. 权利要求7的方法，其中环巴胺-KAAD按以下浓度使用：

a. 约0.025μM至约2.5μM的浓度；或

b. 约0.25μM的浓度。

9. 权利要求1-8中任一项的方法，其中表达胰腺内胚层谱系特征性标志物的细胞被进一步分化成表达胰腺内分泌谱系特征性标志物的细胞。

10. 权利要求9的方法，其中胰腺内分泌细胞是表达β细胞谱系特征性标志物的细胞，例如β细胞。

11. 权利要求10的方法，其中表达β细胞谱系特征性标志物的细胞表达PDX1以及至少一种以下转录因子：NGN3、NKX2.2、NKX6.1、NEUROD、ISL1、HNF3β、MAFA、PAX4和PAX6。

12. 权利要求1的方法，其中所述确立的多能干细胞系为确立的人胚胎干细胞系。

13. 权利要求1的方法，其中所述确立的多能干细胞系为H1、H7或H9。