[发明专利]一种阿尼芬净的纯化方法

说明书

技术领域

本发明属于制药领域，涉及一种棘白菌素类抗真菌化合物的纯化方法。具体来说，本发明涉及抗真菌化合物阿尼芬净通过大孔吸附树脂进行纯化的方法。

发明背景

近年来，随着肿瘤化疗、器官移植、艾滋病等发病率的增加，深部真菌感染的发生率及由此引起的死亡率持续上升，已经成为临床较为棘手的问题之一。棘白菌素类化合物具有较好的抗真菌活性，包括棘白菌素B、棘白菌素C、肺念菌素A0、肺念菌素B0和WF11899等。该类化合物可进一步修饰为半合成药物，依次上市的有米卡芬净、卡泊芬净和阿尼芬净。上述半合成药物的起始原料均由微生物发酵获得，含有大量的结构类似的副产物，给后续终产物的纯化带来了极大的困难。

阿尼芬净属于棘白菌素类抗真菌药物，CAS号为166663-25-8，分子量为1140.24，结构式如下式Ⅰ所示，2006年首次在美国上市，药用剂型为注射剂，主要应用于深部真菌感染，特别是念珠菌感染的治疗。

在CN93103587和CN00805697中公布了阿尼芬净的制备方法，以发酵产物为起始原料，通过脱酰化酶处理得母环，后与侧链戊氧三联苯甲酰基连接制得阿尼芬净粗品，再经液相制备柱纯化获得阿尼芬净纯品，这两个申请中未公开制备柱的填料和洗脱溶液，具体的纯化方案未知，并且液相制备柱的纯化方法在工业上放大，目前还存在一定的难度。

Timothy N,John V等(commercialization and late-stage development of semi-synthetic antifungal API:anidulafungin/D-Fructose(Eraxis)，organic process research and development12,447.2008)公布了制备阿尼芬净-果糖共晶复合物的方法，其中母环与侧链连接制得粗品后，直接与D-果糖形成共晶复合物，该文献中没有报道终产物的纯度和关键的纯化技术方案。

根据CN00805697中公开的方法可制得纯度为97％的阿尼芬净粗品，而作为药物其对纯度和杂质都有较高的要求，以保证药物的有效性和安全性。阿尼芬净作为半合成药物，起始原料中含有的结构类似的杂质以及自身分子结构的不稳定性，决定了其相关杂质的控制是纯化技术方案的关键点，在CN201310146413.6中公开了一种用硅胶柱层析纯化阿尼芬净粗品的方法，该方法可将阿尼芬净的纯度提高至98％以上，而在该公开文本中未提及纯化前后杂质含量信息，然而对于药物而言其API中杂质含量的控制是影响药物药效与安全性的重要影响因素之一。在现有技术中关于阿尼芬净中杂质含量的控制方法报道很少，因此一种新的阿尼芬净的纯化方法亟需开发以满足原料药的工业化生产。

发明内容

本发明提供了一种阿尼分净的纯化方法，通过使用大孔吸附树脂，实现阿尼芬净与关键杂质的有效分离，包括以下步骤：

(a)取阿尼芬净粗品，上样于大孔吸附树脂；

(b)用酸性或中性水溶液洗涤树脂柱，再用体积百分比为0％-50％有机溶剂的酸性水溶液洗涤树脂柱；

(c)用体积百分比为40％-80％有机溶剂的酸性水溶液洗脱吸附于树脂上的阿尼芬净，收集洗脱液；

(d)合并收集得到的洗脱液，分离得到阿尼芬净。

其中，步骤(a)包括将阿尼芬净粗品溶解于有机溶剂的水溶液中，所述有机溶剂的水溶液的体积百分比为50％-60％，有机溶剂可选自甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈或丙酮中一种或它们的任意混合。将上述溶液，上样于湿法或干法装柱的大孔吸附树脂柱内，进行动态吸附(动态吸附具体指上样的同时保持柱下端有液体缓慢的流出)，吸附过程中保持液体流速在2d/s(d/s表示滴/秒)。其中，所述大孔吸附树脂的类型为聚苯乙烯类树脂，优选非极性或弱极性的聚苯乙烯类树脂，具体优选为H-60、HP20、HP20ss、HZ20ss、XAD-1600、XAD-4，更优选H-60、HP20ss、HZ20ss，非限制性的优选孔径为75-300μm。

其中，洗涤步骤(b)包括吸附完毕后，先用酸性或中性水溶液洗涤树脂柱，再用体积百分比为0％-50％有机溶剂的酸性水溶液进行洗涤，优选用体积百分比为10％-45％有机溶剂的酸性水溶液进行洗涤，以除去大极性的杂质。所述酸性水溶液和有机溶剂的酸性水溶液的PH为2-6，优选2.5-4.5，更优选3.0-3.5；有机溶剂的酸性水溶液的使用量约2BV(BV代表柱体积的意思)，洗涤液的流速为1BV/h。