[发明专利]血清Exosomes来源的长链非编码RNA LINC00470的应用方法

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及血清Exosomes来源的LncRNA LINC00470在胶质瘤诊断中的应用方法。

背景技术

胶质瘤约占所有原发性神经系统肿瘤的60％,可发生于中枢神经系统的任何部位和任何年龄，手术切除是首选的治疗方法。由于胶质瘤多呈浸润性生长无明确的边界，手术难以真正彻底切除，而且术后局部复发率高，虽然近年来影像学诊断技术不断发展，显微神经外科技术得到应用，但是胶质瘤的诊断和治疗总体上并没有明显的进步，大多在确诊后数年死亡。目前，对胶质瘤的早期确诊和规范治疗还难以令人满意，因此，寻找无创伤性的胶质瘤早期诊断标志物对高危人群进行筛查，以便对胶质瘤患者进行早期诊断、早期治疗，提高患者生存率，一直是神经科学领域研究的主要任务。

Exosomes是一类直径为30-150nm的囊泡,含有RNA、脂质和蛋白质等成分。在血液，唾液，尿液，脑脊液和母乳等多种体液中均有存在，可在体液中来回穿梭，在细胞之间运送遗传物质和蛋白质。肿瘤在生长过程中会不断地将Exosomes释放到周围环境中去，同时Exosomes可以在4℃条件下保存96小时或是-70℃下保存更长时间,而且通过在血清中分离Exosomes进行胶质瘤诊断克服了直接利用血液提取分子进行肿瘤诊断的血液中非检测物质的影响，使检验结果更加真实，精确。这些特点使得Exosomes有助于肿瘤的早期诊断和预后判断。通过研究在膀胱癌患者尿液来源的Exosomes中发现了PCA-3,TMPRSS2两个生物标志物；在黑色素瘤患者血浆Exosomes中肿瘤相关标志物CAV1表达水平明显增加，以此可诊断黑色素瘤，在肺癌模型发现Exosomes中的miRNA可作为肺癌的标志物。利用Exosomes来源的LncRNA LINC00470来诊断脑胶质瘤不但能更好的对胶质瘤患者进行诊断，提早治疗，而且使得检验结果更加灵敏，特异。以上显示出血清Exosomes来源的LncRNA LINC00470在胶质瘤早期诊断和筛查中的巨大潜力。

发明内容

本发明的目的在于提供一种血清Exosomes来源的LncRNA LINC00470(long intergenic non-protein coding RNA470)定位于染色体18p11，GeneBank登录号：NR-023925的应用方法，尤其是一种能够用于制备胶质瘤高危人群的筛查、早期诊断或者胶质瘤患者的预后制剂的应用方法。研究证实血清Exosomes来源的LncRNA LINC00470可用于胶质瘤患者的诊断，Exosomes来源的LncRNA LINC00470表达下调与胶质瘤组织验证结果具有一致性，且检验结果的灵敏性高，特异性好。因此Exosomes可用于胶质瘤高危人群的筛查和早期诊断和预后。

血清Exosomes来源的长链非编码RNA LINC00470的应用方法，所述的血清Exosomes来源的长链非编码RNA LINC00470用于制备胶质瘤高危人群的筛查、早期诊断或者胶质瘤患者的预后制剂，该长链非编码RNA LINC00470的序列见SEQ NO:1。

所述的用于制备胶质瘤高危人群的筛查、早期诊断或者胶质瘤患者的预后制剂包括实时荧光定量PCR检测试剂。

所述的实时荧光定量PCR检测试剂包括进行实时荧光定量PCR的特异性引物：

Lnc RNA LINC00470正向引物：5′-AAACGGTCAAGAAGAAGTCA-3′,

Lnc RNA LINC00470反向引物:：5′-CTGTTGCTCAGCGTGTAGGA-3′。

所述的实时荧光定量PCR检测试剂为试剂盒，

该试剂盒包括：(1)从胶质瘤组织中抽提总RNA所用试剂，包括RNA稳定溶液、Trizol试剂、三氯甲烷、异丙醇、无酶水；(2)以总RNA为模板将LncRNA LINC00470逆转录为cDNA所用试剂，包括逆转录缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸、RNA酶抑制剂、MMLV逆转录酶以及LncRNA LINC00470所用随机引物；(3)将cDNA实时定量PCR所用试剂，包括LncRNA LINC00470实时荧光定量PCR特异性引物、U6snRNA内参特异性PCR引物、实时荧光定量SYBR染料、无酶水；

LncRNA LINC00470实时荧光定量PCR特异性引物：

LINC00470正向引物5'-AAACGGTCAAGAAGAAGTCA-3'